[發明專利]利用RT-LAMP快速檢測甘蔗黃葉病毒的方法

無效

• 申請號: 201310502520.8
• 申請日: 2013-10-23
• 公開（公告）號: CN103509881A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 陳保善;司慧娟;溫榮輝;呂榜麗;周龍武
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 黃永校

1.利用RT-LAMP快速檢測甘蔗黃葉病毒的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）根據NCBI已報道的甘蔗黃葉病毒的CP蛋白的核苷酸序列，通過多序列比對選擇相對保守序列，通過在線LAMP引物設計軟件primerExplorer?V4設計4條引物，其中包括2條外引物F3/B3和2條內引物FIP/BIP；

2)利用RNAiso?Plus法提取甘蔗植株的總RNA；

3）利用M-MLV反轉錄酶把提取的RNA轉化為cDNA；

4)設置不同的Mg²⁺濃度、dNTPs的濃度以及甜菜堿的濃度，確定最佳反應體系；分別改變反應的溫度進行RT-LAMP擴增反應，RT-LAMP反應溫度為61-63℃，反應時間為60-80min；

5）在最佳反應參數的條件下，以未感染樣品作為陰性對照驗證這一方法的特異性；

6）實驗結果通過肉眼判斷和利用1.5%的電泳檢測進行驗證或者熒光染料檢測可以檢測出甘蔗黃葉病毒。

2.根據權利要求1所述的利用RT-LAMP快速檢測甘蔗黃葉病毒的方法，其特征在于，所述2條外引物F3/B3和2條內引物FIP/BIP的序列為：

F3:5-GCAATCGCACTTGAAGTGGA-3

B3:5-GCATTCAAATCGGCAGACG-3

FIP:5-TTCTTGGCGTTCCTCTTGACGG-TGCTCCCAAACAACAACAGG-3

BIP:5-ACGTCAGCTGACCAGTTTTGGT-TTGTCCTGCTAGGCTCGA-3。