[發(fā)明專利]硒甲基硒代半胱氨酸的拆分方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310502507.2
• 申請日: 2010-02-10
• 公開（公告）號: CN103614449A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發(fā)明（設計）人: 王玲
• 申請（專利權）人: 王玲
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P13/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明屬于氨基酸領域，涉及硒甲基硒代半胱氨酸的拆分方法。

背景技術

硒是人體必須的微量元素，具有抗癌、防癌、保護心臟、防治白內障、克山病和大骨節(jié)病、延緩衰老、解重金屬毒等功能。硒缺乏將引起含硒酶活性降低，氧自由基清除受阻，生物膜損傷，解毒和免疫功能減退等一系列機體功能障礙，從而導致多種疾病發(fā)生。補充硒元素是預防缺硒癥發(fā)生的有效方法。目前，國內的硒元素補充劑有亞硒酸鈉、硒酸鈉、硒化卡拉膠、硒代甲硫氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸等。硒甲基硒代半胱氨酸是一種含硒天然氨基酸，存在于大蒜和洋蔥等植物中，它具有補充硒元素、防治癌癥、抗氧化、抗衰老、防治心腦血管疾病、解重金屬毒等作用，可應用于醫(yī)藥和營養(yǎng)保健等方面。作為硒元素補充劑的硒甲基硒代半胱氨酸一般為L型，天然硒甲基硒代半胱氨酸一般為L型，而化學合成的硒甲基硒代半胱氨酸一般為D、L混合型。為制備光學純L型硒甲基硒代半胱氨酸與D型硒甲基硒代半胱氨酸，本發(fā)明提供了硒甲基硒代半胱氨酸的拆分方法，該方法操作方便、成本較低、適合工業(yè)化制備光學純L型和D型硒甲基硒代半胱氨酸。

發(fā)明內容

本發(fā)明包括以下內容：

1、DL-硒甲基硒代半胱氨酸的拆分

(1)米曲霉氨基酰化酶拆分法

將DL-硒甲基硒代半胱氨酸溶于氫氧化鈉水溶液，滴加乙酰氯反應得N-乙酰-DL-硒甲基硒代半胱氨酸鈉，然后用鹽酸或硫酸酸化得N-乙酰-DL-硒甲基硒代半胱氨酸；

將N-乙酰-DL-西甲基硒代半胱氨酸溶于緩沖溶液，加入米曲霉氨基酰化酶，進行酶解反應，酶解完畢后，將溶液用強酸性陽離子交換樹脂分離，用水和氨水洗脫得N-乙酰-D-硒甲基硒代半胱氨酸和L-硒甲基硒代半胱氨酸；將N-乙酰-D-硒甲基硒代半胱氨酸用強酸，如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸或硫酸等，加熱水解完全，然后用氨水中和得D-硒甲基硒代半胱氨酸；所述酶解反應是在pH4-10、溫度為10-60℃的條件下進行的。

(2)產(chǎn)氨基酰化酶的固定化米曲霉菌體拆分法

采用常規(guī)方法將產(chǎn)氨基酰化酶的米曲霉菌體用明膠-戊二醛或明膠-甲醛固定，得固定化米曲霉菌體，并裝成柱反應器，讓含有N-乙酰-DL-硒甲基硒代半胱氨酸的溶液流過固定化米曲霉菌體柱反應器，收集拆分流出液，將拆分流出液用強酸性陽離子交換樹脂分離，用水和氨水洗脫得N-乙酰-D-硒甲基硒代半胱氨酸和L-硒甲基硒代半胱氨酸；將N-乙酰-D-硒甲基硒代半胱氨酸用強酸，如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸或硫酸，加熱水解完全，然后用氨水中和得D-硒甲基硒代半胱氨酸；所述拆分反應是在pH4-10、溫度為10-60℃的條件下進行的。

(3)木瓜蛋白酶拆分法

將N-乙酰-DL-硒甲基硒代半胱氨酸溶于緩沖溶液中，加入苯胺或對甲基苯胺，再加入木瓜蛋白酶，進行酶促反應，反應完畢后，過濾，不溶物為N-乙酰-L-硒甲基硒代半胱氨酸苯胺或N-乙酰-L-硒甲基硒代半胱氨酸對甲基苯胺，用鹽酸或硫酸加熱水解完全，然后用氨水中和得L-硒甲基硒代半胱氨酸；濾液含N-乙酰-D-硒甲基硒代半胱氨酸，減壓濃縮后用鹽酸或硫酸加熱水解完全，然后用氨水中和得D-硒甲基硒代半胱氨酸；所述酶促反應是在pH3-9、溫度為20-70℃條件下進行的。

具體實施方式

下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明，但應理解本發(fā)明的范圍非僅限于這些實施例的范圍。

實施例1：

米曲霉氨基酰化酶拆分DL-硒甲基硒代半胱氨酸：

將0.1mol?DL-硒甲基硒代半胱氨酸溶于200ml20％氫氧化鈉水溶液，冰水浴下，慢慢滴加0.15mol乙酰氯，然后升溫至25℃反應6h，用茚三酮檢測至無氨基酸反應，用濃鹽酸調節(jié)pH至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，將有機相合并后減壓蒸干溶劑，得N-乙酰-DL-硒甲基硒代半胱氨酸20.1克，收率89.73％。

將0.1mol?N-乙酰-DL-硒甲基硒代半胱氨酸溶于500ml?pH4的HAc-NaAc緩沖溶液，加入22.4mg米曲霉氨基酰化酶，控制溫度10℃，反應約12小時后將溶液于90℃加熱使酶變性沉淀，過濾，濾液用強酸性陽離子交換樹脂分離，用水和5％氨水洗脫。將水洗脫液減壓蒸干后，得N-乙酰-D-硒甲基硒代半胱氨酸，將其溶于200毫升濃鹽酸中，于95℃回流3小時水解完全，用氨水中和，減壓蒸干溶劑得固體，用甲醇溶解，濾去不溶物，濃縮得D-硒甲基硒代半胱氨酸7.5g，收率82.42％。將5％氨水洗脫液減壓蒸干后，得L-硒甲基硒代半胱氨酸7.7克，收率84.62％。

實施例2：