[發明專利]檢測10種海域致病菌的基因芯片

無效

• 申請號: 201310499649.8
• 申請日: 2013-10-22
• 公開（公告）號: CN103540668A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 蘇秀榕;周君;李太武
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10;C12Q1/04
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 程曉明

技術領域

本發明涉及細菌基因芯片，具體涉及檢測10種海域致病菌的基因芯片。

背景技術

隨著人類對海洋開發力度的加大，海域生態環境承載的壓力也與日俱增，而由于病原微生物在海洋環境中的存在與適宜條件下的大量繁殖，影響了人類對海洋的開發與利用活動，影響了近岸海域的海洋功能，也對人體健康造成了潛在的威脅。首先如人、畜共患致病菌通過食用海產品等途徑感染人類，嚴重危及人類的健康和生命安全，因海產品中的霍亂弧菌和副溶血弧菌等引發的霍亂和腹瀉等事件頻發。其次，由于濱海游泳、水上運動、旅游、度假等休閑娛樂活動而傳播的細菌性疾病，已成為嚴重的公眾健康問題。還有我國沿海有600多個大型排污口，約84%的入海排污口超標排放污染物。而船舶排放壓艙水及受到污損的船體、錨鏈等也是造成地理性隔離水體間有害生物傳播的最主要途徑。有些致病微生物的抗性遠遠超過陸生微生物，也是引發大多數感染性疾病的病原體，它給人類帶來的災難有時甚至是毀滅性的。因此，致病菌的快速、準確、靈敏、特異的診斷技術是有效預防感染性疾病發生，控制其暴發性傳播的前提和關鍵。因為自然環境中僅有小于1%左右的微生物可培養，而基因芯片不需要活的細菌，只要有DNA即可；基因芯片具有高通量、平行性、微型化、自動化、快速靈敏、定量、樣品用量少等顯著特點。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種高通量、檢測靈敏的檢測10種海域致病菌的基因芯片。

本發明的技術方案是檢測10種海域致病菌的基因芯片，包括固相載片，所述固相載片上設有質控探針和檢測探針，所述檢測探針如下：陰溝腸桿菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示，遲緩愛德華菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示，糞鏈球菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6和SEQ?ID?NO.7所示，強壯弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9和SEQ?ID?NO.10所示，哈維氏弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11和SEQ?ID?NO.12所示，副溶血弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.13、SEQ?ID?NO.14和SEQ?ID?NO.15所示，燦爛弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.16和SEQ?ID?NO.17所示，創傷弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.18、SEQ?ID?NO.19、SEQ?ID?NO.20、SEQ?ID?NO.21和SEQ?ID?NO.22所示，鰻弧菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.23和SEQ?ID?NO.24所示，黃海希瓦氏菌的檢測探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.25、SEQ?ID?NO.26和SEQ?ID?NO.27所示。

所述質控探針HEX的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.28所示，PC的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.29所示，NC的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.30所示。

與現有技術相比本發明優點在于檢測10種海域致病菌的基因芯片，包括固相載片，固相載片上設有質控探針和檢測探針，檢測探針的核苷酸序列組份為SEQ?ID?NO.1-SEQ?ID?NO.27所示，可以同時檢測出陰溝腸桿菌、遲緩愛德華菌、糞鏈球菌、強壯弧菌、哈維氏弧菌、副溶血弧菌、燦爛弧菌、創傷弧菌、鰻弧菌和黃海希瓦氏菌，而且不需要活的細菌，只要有DNA即可；具有高通量、平行性、微型化、自動化、快速靈敏、定量、樣品用量少等顯著優點。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明作進一步詳細描述。

一、固相載體（基片）的選取

常用的固相載體包括尼龍膜、硝酸纖維素膜、玻璃片和各種有機高分子制作的薄膜等，本實施例所使用的為75.5mm×25.2mm×1.0mm的玻璃片作為基片，要求外觀無劃痕、無缺損，玻璃片表面要經過化學修飾后，才能將DNA探針固定在基片上，現有的玻璃片表面化學修飾主要有氨基修飾、醛基修飾和巰基修飾。本實施例選擇對玻璃片進行醛基修飾，為北京博奧生物有限公司的產品。

二、探針的制備

1、質控探針的設計：在芯片設計時采用了表l所示的質控探針，探針均在NCBI中進行了比對，和己知基因無明顯同源性，也可市售其它質控探針，只要與己知基因無明顯同源性即可。

表1：質控探針表