[發(fā)明專利]一株豬肺炎支原體菌株

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310498958.3
• 申請日: 2013-10-22
• 公開（公告）號: CN103484414A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙凱;劉洪斌;張鳳強(qiáng);毛春玲
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 侯靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株豬肺炎支原體菌株。

背景技術(shù)

豬支原體肺炎（Mycoplasmal?pneumonia?of?swine，MPS），又稱豬氣喘病或豬地方流行性肺炎，MPS是一種慢性、接觸性、非致命性的呼吸系統(tǒng)疾病，國內(nèi)發(fā)病率達(dá)80%以上，該病即可影響豬群生產(chǎn)性能和增重及飼料報(bào)酬，又可繼發(fā)感染其它傳染病，是養(yǎng)豬業(yè)重點(diǎn)控制的傳染病之一。豬支原體肺炎的病原體是豬肺炎支原體（Mycopasma?hyopneumoniae，Mhp），可通過病豬與健康豬直接接觸或通過氣溶膠傳播，一般傳播距離可達(dá)到4.7km，最新研究發(fā)現(xiàn)其傳播距離可遠(yuǎn)至9.2km，因此，Mhp極難防控。豬感染Mhp后會出現(xiàn)呼吸困難、機(jī)體消瘦、免疫抑制等。

豬肺炎支原體是軟皮綱、支原體目、支原體科、支原體屬、豬肺炎支原體種。Mhp無細(xì)胞壁，具有高度多形性，大小不等，在液體培養(yǎng)物和肺觸片中常呈球狀，直徑約0.2-0.5μm，并由小球狀串連成環(huán)狀，直徑約0.8-20μm，偶有新月狀、長鏈狀和絲狀。豬肺炎支原體體外培養(yǎng)對生長條件要求苛刻，營養(yǎng)要求高且生長速度緩慢，分離過程中受豬的其他支原體（如豬鼻支原體）的影響，導(dǎo)致豬肺炎支原體分離篩選難度較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一株豬肺炎支原體菌株。

一株豬肺炎支原體菌株，已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC?No.8096，保藏日期為2013年8月15日，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰路1號院3號，它命名為豬肺炎支原體（Mycopasma?hyopneumoniae）HDZK-Mhp57。

豬肺炎支原體（Mycopasma?hyopneumoniae）HDZK-Mhp57，它的菌落形態(tài)為典型的支原體煎荷包蛋形菌落；生理生化特征：葡萄糖反應(yīng)陽性、甘露糖反應(yīng)陽性、精氨酸反應(yīng)陰性、尿素酶反應(yīng)陰性、抗血清抑制生長實(shí)驗(yàn)陽性、熒光抗體實(shí)驗(yàn)為陽性。

豬肺炎支原體（Mycopasma?hyopneumoniae）HDZK-Mhp57的分子生物學(xué)鑒定結(jié)果：其16S?rRNA序列與NCBI中公布的相近種屬的豬肺炎支原體HN0613的同源性為98%，為一新支原體菌株。

本發(fā)明一株豬肺炎支原體菌株，已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC?No.8096，保藏日期為2013年8月15日，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰路1號院3號，它命名為豬肺炎支原體（Mycopasma?hyopneumoniae）HDZK-Mhp57。

本發(fā)明中豬肺炎支原體（Mycopasma?hyopneumoniae）HDZK-Mhp57，制備的無細(xì)胞培養(yǎng)基中活菌滴度高達(dá)1012CCU/mL；免疫原性好，肺炎病變減少率可達(dá)90%以上，可大大降低獸用生物制品的生成成本。豬肺炎支原體（Mycopasma?hyopneumoniae）HDZK-Mhp57可用于制備成預(yù)防用獸用生物制品或獸藥，為研制豬支原體肺炎滅活疫苗、基因工程疫苗和豬肺炎支原體診斷試劑盒奠定了基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1為具體實(shí)施方式中的熒光抗體試驗(yàn)結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式一株豬肺炎支原體菌株，已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC?No.8096，保藏日期為2013年8月15日，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰路1號院3號，它命名為豬肺炎支原體（Mycopasma?hyopneumoniae）HDZK-Mhp57。

本實(shí)施方式中一株豬肺炎支原體菌株，它的分離過程如下：

一、取支原體肺炎病變肺臟，在超凈臺內(nèi)用無菌手術(shù)剪刀剪取發(fā)病部位邊緣組織，放入無菌平皿，將病變肺臟組織剪成小塊，接種Friis肉湯，37℃培養(yǎng)至培養(yǎng)液變色；

二、培養(yǎng)液變色后，取0.5mL經(jīng)0.45μm濾器過濾的培養(yǎng)物加入到1.5mL加了青霉素的Friis肉湯培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)；

三、每隔一周傳代一次，前兩周要在培養(yǎng)液中加入50%的豬鼻支原體特異性血清，傳至第九周對培養(yǎng)物進(jìn)行稀釋涂板，篩選單落，重復(fù)三次后保存菌株。

鑒定按以下步驟：

一、鏡檢

Friis平板接種培養(yǎng)物，37℃培養(yǎng)；挑取單菌落涂片，分別進(jìn)行革蘭氏染色和瑞氏染色，鏡檢；

結(jié)果：

病變組織接種到Friis培養(yǎng)液中，6d后培養(yǎng)液變色；過濾接種后在5-6d后培養(yǎng)液變?yōu)辄S色；接種到平板37℃培養(yǎng)6-7d后出現(xiàn)典型的支原體煎荷包蛋形菌落。