[發明專利]一種山參發根及其培育方法

無效

• 申請號: 201310498167.0
• 申請日: 2013-10-22
• 公開（公告）號: CN103555758A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 李昌禹;王英平;盧淑波;艾軍;鄭培和;雷秀娟
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/06
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

1.一種山參發根的制備方法，其特征在于：

以山參根、莖及葉片等為外植體，用活化了的發根農桿菌進行轉化，使發根農桿菌Ri質粒上的T-DNA上的致發根基因整合到山參外植體細胞核DNA中，表達形成毛狀根；每一根山參發根即為一個單克隆，經過繼代培養和多次篩選，逐步建立起山參懸浮培養無性系。

2.?一種山參發根的制備方法，包括以下步驟：

1）外植體的預培養：

取山參新鮮、健康的根或莖或葉片，洗凈；用0.1%的升汞滅菌10min，無菌水漂洗4次，每次不少于1min，然后吸干表面水分；再于超凈臺上將外植體切成0.5cm×1.0cm大小，轉移到已滅菌的1/2MS固體培養基上；于黑暗條件下預培養2~7d；

2）發根農桿菌的制備：

挑取發根農桿菌單菌落，接種于5mL液體YEB內，28℃黑暗條件下振蕩培養過夜，于次日接種到50ml液體YEB中繼培養4~6h后備用；

3）山參葉片與發根農桿菌共培養轉化：將經過預培養的山參外植體浸入已培養好的發根農桿菌菌液中，感染5~10?min，然后，用無菌濾紙將菌液吸凈；再接種于含抗生素1/2MS固體培養基上，約經過30d~50d培養生出發根；

4）發根培養：

去菌培養：切割下由外植體上長出的發根，置于含抗生素（頭孢噻吩300~500mg/L）的1/2MS固體培養基上，進行去菌培養，每3~5d轉繼代1次，進行3~5次；

擴大培養：將無菌的發根1.0g移入盛有50mL?1/2MS液體培養基的100mL三角瓶內，于黑暗條件下，室溫22℃~25℃，110rpm，懸浮培養；

山參發根無性系的建立：經3~5代的懸浮培養，按發根克隆的來源分別建立不同的無性系。