[發明專利]一株解淀粉芽孢桿菌及其液體制劑在治療松爛皮病中的應用

無效

• 申請號: 201310494921.3
• 申請日: 2013-10-21
• 公開（公告）號: CN103555618A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 朱天輝;朱涵明月;李姝江;張靜;劉洋;韓珊;譙天敏;張麗娜
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

技術領域

本發明涉及生態學領域，尤其涉及的是一株解淀粉芽孢桿菌及其液體制劑在治療松爛皮病中的應用。?

背景技術

松爛皮病（Cenangium?ferruginosum）是世界著名松屬病害，發生在2～10年生枝干上，主要為害皮層部份，苗木、幼樹到成年樹均可受害，輕者枝條枯死，重者全株死亡。1～3月間，部分小枝、側枝或主干上部的針葉先變為黃綠至灰綠色，后逐漸變成褐色至紅褐色，此時病枝干與健康枝干相比無明顯變化。到3月末，當針葉變為紅褐色時，被害枝干則明顯表現出因失水而收縮起皺的病狀。針葉逐漸脫落，葉痕處稍膨大。小枝被害時，則易干枯死亡，表現枯枝病狀。若側枝基部的皮部發病，側枝則枯死下垂，呈彎曲狀。主干發病時，病部開始有輕微的流脂現象，隨后流脂加劇，病皮亦逐漸干縮下陷，發生潰瘍呈爛皮狀?；疾∑右着c木質部分離。4月份，病部膨大部分破裂，在皮下生出病菌子實體即子囊盤，初為黃褐色，后呈暗褐色，逐漸變大，單生或數個簇生，到5月下旬至6月上旬即成熟。成熟的子囊盤呈杯狀或盤狀，雨后張開變大，表面為淡黃褐色，干后收縮變黑并僵化。目前主要采用化學防治和營林技術，而生物防治措施研究尚未涉及?；瘜W防治雖是一種有效的防治手段，但存在病原菌抗藥性、環境與食品安全、藥害等許多實際問題，一些化學殺菌劑在許多發達國家和地區已嚴格限制使用。而與環境友好的生物農藥越來越受到人們的青睞，是未來農業可持續發展的重要組成部分。?

因此，現有技術存在缺陷，需要改進。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術在治療松爛皮病中的缺陷，提供了一株解淀粉芽孢桿菌及其液體制劑在治療松爛皮病中的應用。?

本發明的技術方案如下：?

一株解淀粉芽孢桿菌，其分類命名為解淀粉芽孢桿菌，Bacillus?amyloliquefaciens，已于2013年09月12日保藏在中國北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.8177。?

所述的解淀粉芽孢桿菌的液體制劑的制作方法，包括以下步驟：?

（1）一級斜面種子：常規方法制作牛肉膏蛋白胨斜面培養基，接種解淀粉芽孢桿菌后，培養制成一級種子；?

（2）二級液體種子：營養肉質培養液經高壓滅菌后，在通氧控制下，按100mL液體盛于300mL三角瓶比例裝瓶，在無菌狀態接種解淀粉芽孢桿菌斜面種子，每瓶接種2支斜面種子，振蕩培養，制成解淀粉芽孢桿菌液體種子；?

（3）液體發酵：營養肉質培養液經高壓滅菌后，在通氧控制下，按200mL液體盛于500mL三角瓶比例裝瓶，在無菌狀態接種解淀粉芽孢桿菌液體種子，接種量為液體總體積的10%，振蕩培養，制成解淀粉芽孢桿菌液體制劑，然后保存。?

所述的解淀粉芽孢桿菌的液體制劑的制作方法，其牛肉膏蛋白胨斜面培養基的成分為牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，瓊脂17g，水1000mL。?

所述的解淀粉芽孢桿菌的液體制劑的制作方法，其營養肉質培養液的成分為牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，松枝條浸漬液1000mL。?

所述的制作方法得到液體制劑。?

所述的液體制劑在治療松爛皮病中的應用，是將病斑刮除干凈，用無菌棉球蘸取液體制劑稀釋液對發病部位進行涂抹，間隔7d一次，共5次。?

所述的液體制劑在治療松爛皮病中的應用，其液體制劑稀釋液為將液體制劑稀釋成1×10⁹cfu/mL的液體制劑，然后再稀釋100倍。?

本發明能夠有效治療松爛皮病。?

具體實施方式

以下結合具體實施例，對本發明進行詳細說明。?

1、內生細菌的分離、純化與保存?

在四川廣元市朝天區核桃根腐病發生地采集健康核桃根系，帶回實驗室分離。采回的樣本用無菌水沖洗干凈，稱取1.0g根組織，用70%的酒精消毒30s，無菌水洗3次后，再用4%的NaClO消毒3min后，無菌水洗3次，吸取最后一次洗滌液100μl涂抹NA平板（牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，瓊脂粉15-20g，蒸餾水1000ml，pH7.0，混勻分裝后121℃高壓滅菌30min），28℃黑暗培養24h，用于表面消毒的對照，檢查表面消毒是否徹底。?