[發(fā)明專利]基于電化學發(fā)光免疫分析的潛在指紋成像的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310493595.4
• 申請日: 2013-10-18
• 公開（公告）號: CN103536295A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇彬;許林茹
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學
• 主分類號: A61B5/117
• 分類號: A61B5/117;G01N33/535;G01N21/76
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學和指紋檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于電化學發(fā)光免疫分析的潛在指紋成像的方法。

背景技術(shù)

潛在指紋是經(jīng)身體自然分泌物（如汗液）轉(zhuǎn)移形成的指紋紋路，目視不易發(fā)現(xiàn)，是案發(fā)現(xiàn)場中最常見的指紋。據(jù)我國各地不完全統(tǒng)計，警方偵破的刑事案件中，利用指紋破案占七成以上，并且比例正在逐年上升。通常情況下，指紋是犯罪分子在現(xiàn)場留下的最直接物證，所以，研究潛在指紋的顯現(xiàn)技術(shù)，是提高指紋物證的采取率和利用率的重要環(huán)節(jié)。

現(xiàn)代指紋學的發(fā)展已經(jīng)具有上百年的歷史，按照顯現(xiàn)原理的不同，傳統(tǒng)的潛在指紋顯現(xiàn)方法主要分為三類：光學顯現(xiàn)法、化學顯現(xiàn)法以及物理吸附法。其基本原理是使用一種光線或物質(zhì)作用于指紋印痕的汗液物質(zhì)，使不能看見的潛在指紋變?yōu)榭梢姷摹０l(fā)展至今，指紋檢測不僅在法醫(yī)鑒定、個體識別方面起著重要作用，同時廣泛應(yīng)用于日常生活中的安全檢驗、訪問控制、個人認證等領(lǐng)域。近年來隨著分析科學的發(fā)展，人們對指紋的研究已不僅僅停留在利用傳統(tǒng)物理或化學手段對其形貌進行觀察，同時更加致力于發(fā)展各種新興技術(shù)如質(zhì)譜成像、紅外/拉曼成像、掃描電化學顯微鏡以及熒光免疫成像等，對指紋中的成分進行分析檢測，從而發(fā)掘出更多有價值的生物學和醫(yī)學信息。比如，恐怖分子是否接觸過爆炸物、一個人是否具有吸煙的習慣，科學家都可以通過指紋檢測來獲取相關(guān)信息。

盡管指紋顯現(xiàn)技術(shù)在刑偵及分析科學中發(fā)揮著重大作用，但是目前在指紋顯現(xiàn)領(lǐng)域中仍然存在諸多困難。例如，在傳統(tǒng)方法中，大多要引用一種外源物質(zhì)來對潛在指紋進行顯現(xiàn)，處理過程較為繁瑣復(fù)雜，同時對樣本具有破壞性。目前廣泛使用的煙熏法和刷粉法中采用的小粒度粉末對技術(shù)人員存在一定的身體損傷。而新興的指紋技術(shù)如質(zhì)譜成像法和紅外/拉曼成像法，則需要用到昂貴的大型儀器和專業(yè)的操作知識，不利于普及。因此目前仍然需要一種簡單、快速、適用范圍廣的方法對潛在指紋進行顯現(xiàn)。

電化學發(fā)光是電化學反應(yīng)和化學發(fā)光相結(jié)合的產(chǎn)物。由于電化學發(fā)光是在電極表面產(chǎn)生的，因此可以反應(yīng)出電極反應(yīng)活性，并且具有背景低、時空可控等優(yōu)點。因此，電化學發(fā)光被廣泛用于成像研究。電化學發(fā)光成像是一種全新的成像技術(shù)，兼有化學發(fā)光成像和電化學的優(yōu)點，能同時提供光學圖像與電化學兩種信號，進行高靈敏高通量檢測。目前并未有利用電化學發(fā)光免疫分析來對指紋進行檢測和成像的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種基于電化學發(fā)光免疫分析的潛在指紋成像的方法，該方法簡單、快速、靈敏且發(fā)光強度高，能夠?qū)χ讣y進行清晰的成像。

一種基于電化學發(fā)光免疫分析的潛在指紋成像的方法，包括：

（1）將指印轉(zhuǎn)移到電極基底上，得到指印樣本；

（2）往所述指印樣本的指印上加入手指代謝物的抗體溶液進行孵育，孵育完成后用緩沖液進行沖洗；

（3）將所述的指印樣本干燥，然后向指印上加入辣根過氧化物酶標記的二抗進行孵育；

或者將所述的經(jīng)（2）處理后的指印樣本干燥，然后向指印上加入生物素標記的二抗，孵育一段時間后沖洗、吹干指印樣本，再向指印上加入鏈霉親和素標記的辣根過氧化物酶進行孵育；

（4）孵育后，用所述的緩沖液沖洗指印樣本，干燥后制備得到工作電極，然后通過電化學發(fā)光成像系統(tǒng)采集指紋圖像。

人類指紋皮膚表面布滿汗腺，觸物留痕。一般來說留在客體表面的指紋物質(zhì)較少，一般為0.11mg，其中99%為水分，會迅速蒸發(fā)掉；固體物質(zhì)只占1%，其中2/3是有機物質(zhì)，如：氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪酸、尿素等；剩余1/3是無機物質(zhì)。首先選擇手指代謝物的抗體（一抗），以及辣根過氧化氫酶（HRP）標記的二抗或者生物素標記的二抗、鏈霉親和素標記的辣根過氧化物，通過抗體與手指代謝物的特異性免疫反應(yīng)，使HRP間接標記到指紋上，然后通過電化學發(fā)光反應(yīng)，即可顯示出指紋紋路。

所述的電極基底為聚苯乙烯鍍金片，也可以為玻碳電極、鉑電極等。

步驟（1）中，所述的指印為血指印或汗?jié)撝赣　?/p>

當所述的指印為血指印時，所述的手指代謝物具體可以為IgG。

當所述的指印為汗?jié)撝赣r，所述的手指代謝物為表皮生長因子、溶菌酶或汗腺抗菌肽Dermcidin。

其中，IgG的抗體為羊抗人IgG，具體可購自生工生物工程有限公司，貨號為DAC1011；表皮生長因子抗體具體可購自生工生物工程有限公司，貨號為DA1709；溶菌酶抗體可購自生工生物工程有限公司，貨號為DA2322；人汗腺抗菌肽Dermcidin抗體可購自百奇生物科技有限公司，貨號AP6718b。