[發(fā)明專利]可促進(jìn)皮膚修復(fù)與再生的美容護(hù)膚品及其制備方法和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310493266.X
• 申請(qǐng)日: 2013-10-18
• 公開（公告）號(hào): CN103550117A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金宜強(qiáng);劉軍;楊立敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海潤(rùn)生生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): A61K8/98
• 分類號(hào): A61K8/98;A61K8/64;A61Q19/00;C12N5/0775
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 肖愛華

1.一種可促進(jìn)皮膚修復(fù)與再生的美容護(hù)膚品的制備方法，其特征在于，按以下步驟順序進(jìn)行：

（1）培養(yǎng)液配置：

配置間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)液，其成分中含有氨基酸、維生素、糖、微量元素、不飽和脂肪酸、抗氧化劑和細(xì)胞生長(zhǎng)因子；

（2）細(xì)胞培養(yǎng)：

將對(duì)數(shù)期的間充質(zhì)干細(xì)胞以1x10^4/ml至1x10^6/ml的密度接種于上一步配置的培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)3-72小時(shí)；所述的間充質(zhì)干細(xì)胞是哺乳動(dòng)物的間充質(zhì)干細(xì)胞，包括骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞；

（3）細(xì)胞激活：

采用細(xì)胞激活方法將間充質(zhì)干細(xì)胞激活，使其分泌有助于皮膚修復(fù)和增強(qiáng)活力的物質(zhì)；所述的細(xì)胞激活方法是：將另一種類型的細(xì)胞與培養(yǎng)液中原來(lái)的細(xì)胞共培養(yǎng)的方法，即共培養(yǎng)法；或者是，采用向細(xì)胞培養(yǎng)液中添加細(xì)胞因子的方法；

（4）去除細(xì)胞、收獲上清液：

去除培養(yǎng)液中的所有細(xì)胞，收獲細(xì)胞培養(yǎng)后的上清液，即得富含細(xì)胞活性因子的皮膚修復(fù)精華液。

2.如權(quán)利要求1所述的美容護(hù)膚品的制備方法，其特征在于，該方法還包括步驟（5）降解、制劑：

往上一步制得的皮膚修復(fù)精華液中添加能夠分解蛋白的物質(zhì)，將其中的大分子蛋白質(zhì)降解為短肽，然后去除分子量超過(guò)3500道爾頓的物質(zhì)，得到富含細(xì)胞活性因子且適于人體皮膚吸收的皮膚修復(fù)精華液；之后，將該皮膚修復(fù)精華液，加入到各種美容護(hù)膚品的配方中，制成可涂抹于皮膚表面的各種不同劑型的美容護(hù)膚品，包括水劑、乳劑、膏劑、霜?jiǎng)?、凝膠劑、凍干產(chǎn)品、粉劑。

3.如權(quán)利要求1或2所述的美容護(hù)膚品的制備方法，其特征在于，步驟（1）中所述的間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)液為：DMEM-LG+F12+BSA+bFGF+TGF-β+PDGF。

4.如權(quán)利要求1或2所述的美容護(hù)膚品的制備方法，其特征在于，步驟（4）中所述的去除培養(yǎng)液中的所有細(xì)胞的方法是：離心和/或過(guò)濾。

5.如權(quán)利要求2所述的美容護(hù)膚品的制備方法，其特征在于，步驟（5）中所述的能夠分解蛋白的物質(zhì)是胰蛋白酶。

6.如權(quán)利要求1或2所述的美容護(hù)膚品的制備方法，其特征在于，

步驟（3）中所述的共培養(yǎng)法，是將神經(jīng)干細(xì)胞與培養(yǎng)液中原來(lái)的間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)的方法，具體按如下步驟進(jìn)行：

A.配置神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液：StemPro神經(jīng)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)液+GlutaMax補(bǔ)充劑；

B.將神經(jīng)干細(xì)胞以1x10^4/ml至5x10^5/ml的密度接種于上一步配置的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)24-72小時(shí)，至對(duì)數(shù)期；

C.收獲神經(jīng)干細(xì)胞，以2:1～1:2的數(shù)量比添加到步驟（2）中的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)物中，共培養(yǎng)12-24小時(shí)；

步驟（3）中所述的向細(xì)胞培養(yǎng)液中添加細(xì)胞因子的方法，是向間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液中添加含有神經(jīng)干細(xì)胞分泌物的培養(yǎng)濃縮液法，具體按如下步驟進(jìn)行：

A.配置神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液：StemPro神經(jīng)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)液+GlutaMax補(bǔ)充劑；

B.將神經(jīng)干細(xì)胞以1x10^5/ml至5x10^5/ml的密度接種于上一步配置的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)24-48小時(shí)；

C.采用離心或過(guò)濾的方法去除神經(jīng)干細(xì)胞，將剩余的其中含有神經(jīng)干細(xì)胞分泌物的培養(yǎng)液，濃縮至原先體積的1/5～1/20；

D.將濃縮液以0.5-20%的體積比添加到步驟（2）中的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)液中，繼續(xù)培養(yǎng)6-24小時(shí)。

7.一種按權(quán)利要求1所述的方法制備得到的可促進(jìn)皮膚修復(fù)與再生的美容護(hù)膚品，其特征在于，它是使用哺乳動(dòng)物的間充質(zhì)干細(xì)胞按所述方法制備而成的皮膚修復(fù)精華液；其中含有體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞分泌到胞外的活性物質(zhì)成分，還含有細(xì)胞培養(yǎng)液配置步驟中添加的營(yíng)養(yǎng)成分氨基酸、維生素、糖、微量元素、不飽和脂肪酸、抗氧化劑和細(xì)胞生長(zhǎng)因子；其中，含有的間充質(zhì)干細(xì)胞分泌到胞外的組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1、單核細(xì)胞趨化蛋白1和表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的濃度分別為：

組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1，1.0～5.0mg/L；

單核細(xì)胞趨化蛋白1，100～500μg/L；

表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，5～50μg/L。