[發明專利]廣州管圓線蟲病早期檢測的分子標記物及引物

有效

• 申請號: 201310491375.8
• 申請日: 2013-10-18
• 公開（公告）號: CN103695532A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 陳小光;孫希;吳忠道
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/12;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 謝敏楠

技術領域

本專利屬于生物學領域，涉及一種可作為早期廣州管圓線蟲病早期檢測的分子標志物，以及所用引物及相關試劑盒。

背景技術

廣州管圓線蟲病又稱嗜酸粒細胞增多性腦膜腦炎。是因吃了生的或不熟的含有廣州管圓線蟲幼蟲的淡水螺肉而感染，幼蟲寄生在中樞神經系統而致病。主要臨床表現為腦膜炎、脊髓膜炎、腦炎或脊髓炎，末梢血和腦脊液內嗜酸性粒細胞數量增高，重型者可有持續性高顱壓；有腦部定位性損壞造成的相應表現；??少數患者可致死或留有后遺癥。廣州管圓線蟲病已被世界公認為新流行或者再流行的人獸共患寄生蟲病，我國衛生部也在2003年將其列為新發傳染病。確診廣州管圓線蟲病需在病人腦脊液或者其他組織中找到蟲體，但檢出率只有百分之十左右。通常該病需要依靠臨床癥狀、流行病學資料和免疫學進行綜合診斷。目前實驗室檢查主要有以下幾種途徑：

一、血液常規檢查：?白細胞總數正常或增加，嗜酸性粒細胞可有不同程度的增多。

二、腦脊液檢查：腦脊液壓力增高，白細胞數量及蛋白含量增加；嗜酸性粒細胞增多。糖、氯化物無明顯變化。極少數病例可找見幼蟲或成蟲。

三、免疫學檢查：?常用的方法為酶聯免疫吸附試驗，抗體陽性可做為輔助診斷。

四、病原學檢查：從腦脊液、眼或其他寄生部位查見本蟲幼蟲或成蟲，但陽性機率極小。

五、影像學檢查：?頭顱MRI表現多種多樣，腦脊髓內多發長條形或結節強化病灶和軟腦膜強化是主要的表現。

眾所周知，廣州管圓線蟲病的免疫診斷最主要是用ELISA法檢測病人血清中特異性抗體?(蛋白質水平)。而microRNA的變化早于蛋白質變化和臨床癥狀的出現，因此適合于疾病的早期診斷。另外由于取材方便，血清或者腦脊液中的microRNA比組織的microRNA具有更好的應用前景。microRNA是一種長度?20?～?24nt?單鏈小分子?RNA，它廣泛存在于各種真核細胞生物中?表達具時序性和組織特異性，在細胞生長、發育、分化、死亡等生物過程中起著重要的作用。microRNA釋放進入外周循環的途徑目前主要考慮有從受損細胞滲透入循環，形成微泡進入循環，由細胞分泌進入循環三種不同的途徑。microRNA耐RNA酶降解，在血清或者腦脊液中可以長期穩定存在，煮沸、反復凍融、酸堿環境及長期保存等方法均不會損失。目前國外相關研究發現miR-1對于急性心肌梗塞有診斷價值；miR-15、miR-16可用于慢性淋巴細胞性白血病的診斷；Let-7對非小細胞肺癌有診斷意義；miR-134可作為肺栓塞的診斷標志物。

?????miR-146a-5p是一種典型的多功能基因，由其下游基因介導，參與各種生理病理過程，如炎癥，免疫及腫瘤的發生發展。?雖然microRNA在各種物種間有較高的保守性，即不同物種間的序列相似，但卻不完全相同。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種蟲源性的microRNA作為廣州管圓線蟲病早期診斷的分子標志物。

本發明的另一個目的在于提供用于檢測廣州管圓線蟲病的引物。

本發明的目的之三在于提供檢測所采用的引物及分子生物學方法。

首先，發明提供了一種與廣州管圓線蟲病檢測相關的分子標記物，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

同時，發明提供了一種用于檢測廣州管圓線蟲病的引物，其特征在于所述引物序列如SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和/或SEQ?ID?NO:4所示。

如SEQ?ID?NO:1所示基因，或者如SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和/或SEQ?ID?NO:4所示引物，可用于制備廣州管圓線蟲病檢測試劑。

發明同時提供了一種廣州管圓線蟲病檢測試劑盒，其特征在于含有如SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3和/或SEQ?ID?NO:4所示的引物。同時，該試劑盒其特征在于其擴增產物中還可含有aca-miR-146a-5p。