[發明專利]一種禽流感病毒H5N1的抗體分子及其檢測試劑盒和用途

有效

• 申請號: 201310489280.2
• 申請日: 2013-10-18
• 公開（公告）號: CN103613664A
• 公開（公告）日: 2014-03-05
• 發明（設計）人: 武婕;柯昌文;林錦炎;張永慧;曾憲鍫;張宏斌
• 申請（專利權）人: 廣東省疾病預防控制中心
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;G01N33/569
• 代理公司: 深圳市百瑞專利商標事務所(普通合伙) 44240
• 代理人: 邢濤

技術領域

本申請屬于生物醫學領域，具體地說是含有特定抗體分子序列模式的、能與高致病性禽流感H5N1病毒有特異結合活性的抗體分子，作為檢測試劑在高致病性禽流感H5N1病毒的ELISA檢測方法中的應用。

背景技術

高致病性禽流感H5N1病毒屬于正粘病毒科流感病毒屬，是具有包膜結構的單股負鏈RNA病毒，含有8個RNA片段，已知可編碼11種病毒蛋白質。H5N1病毒是高變異病毒，目前在我國流行著4種代表株：A/H5N1/Anhui/1/2005、A/Guangdong-Shenzhen/1/2011、A/Hubei/1/2010and?A/Chicken/Hong?Kong/AP156/2008，能特異結合這4種代表株的抗體，就可作為檢測我國H5N1病毒的試劑。

當前，以抗原抗體特異結合活性為基礎的酶聯免疫反應（ELISA）是一種快速、方便、適于現場檢測的病毒檢測方法，它不需要精密的儀器設備和復雜的技術，特異性和靈敏度較好，易于推廣，特別適合疫情暴發時的現場應對和疾病的快速篩查。國內大部分試劑是以H5N1滅活病毒為檢測抗原去檢測血清抗體，原理是將濃縮后的H5N1滅活病毒作為抗原包被微孔板，應用間接ELISA原理檢測血清中抗禽流感H5N1的抗體。此外，還有以H5N1病毒結構蛋白HA蛋白為檢測抗原的H5N1抗體ELISA檢測試劑盒。而用抗體去檢測抗原的方法在國內還沒有商品化的試劑盒。雖然用抗體檢測抗原的ELISA法的靈敏度和特異性不及常用的擴增核酸檢測病毒，但ELISA法操作簡便，不需要精密的儀器設備，適用于大規模篩查、疫情的現場處置和實驗條件比較差的地區，是一種有效的病毒檢測方法。但由于H5N1病毒抗原變異快，針對某一年流行株制備的抗體有可能不結合新出現的流行株，需要不斷制備新的抗體作為檢測試劑，限制了商品化的開發和推廣，而本項目制備的抗體具備結合當前在我國流行的4種H5N1病毒的特性，可作為ELISA方法的檢測試劑。

噬菌體抗體文庫技術是一種制備抗體的新技術，噬菌體抗體庫可用于制備抗體。將編碼各種抗體片段的基因重組到噬菌體基因中，使抗體分子以融合蛋白的形式呈現在噬菌體表面，形成一個匯集有眾多不同序列的抗體文庫，從中篩選目的蛋白的抗體分子，該技術具備簡便、快捷、不需要制備免疫源性蛋白等特點，在抗體研究領域得到較多的應用。

發明內容

本申請公開了一種禽流感H5N1病毒的抗體分子，其中抗體分子的重鏈可變區包含SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2，所述抗體分子的輕鏈可變區包含SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4。

優選的，抗體分子的重鏈第52-61位氨基酸序列是SEQ?ID?NO:1；重鏈第101-104位氨基酸是SEQ?ID?NO:2；輕鏈第46-49位氨基酸序列是SEQ?ID?NO:3；輕鏈第87-92位氨基酸序列是SEQ?ID?NO:4。

更優選的抗體分子具有SEQ?ID?NO:5的氨基酸序列。

抗體分子可以是N端、內部或C端修飾，例如寡聚化和/或糖基化和/或與標記物的綴合的修飾。

本申請還公開了一種含有上述抗體分子的檢測禽流感H5N1病毒的檢測試劑盒。

本申請又公開了上述抗體分子在制備禽流感H5N1病毒檢測試劑中的用途。

以本申請抗體分子作為ELISA檢測試劑，可特異性的與四種H5N1病毒標準株裂解液(A/Anhui/1/2005、A/Hubei/1/2010、A/Guangdong-Shenzhen/1/2011,和A/Chicken/Hong?Kong/AP156/2008)結合，而不與腸道病毒EV71、I型登革病毒、新甲型H1N1病毒（pdmH1N1）、季節性H1N1病毒、季節性H3N2病毒和B型流感病毒結合，具有很高的特異性。

附圖說明

圖1.說明7個陽性噬菌體抗體分子與A/H5N1/ANHUI/1/2005毒株的ELISA結合活性；

圖2.說明以實施例1抗體為基礎的檢測試劑盒的特異性；

圖3說明以實施例1抗體為基礎的檢測試劑盒的敏感性；

圖4說明實施例1中一個抗體分子的氨基酸序列模式。

具體實施方式

本申請的這些特征和優點以及其他特征和優點在參考以下具體實施方式之后將變得顯而易見。