[發明專利]雞β-防御素AvBD6基因及其乳酸菌載體的構建方法無效
| 申請號： | 201310489097.2 | 申請日： | 2013-10-18 |
| 公開（公告）號： | CN103614381A | 公開（公告）日： | 2014-03-05 |
| 發明（設計）人： | 祁克宗;汪雪雁;段慧;周秀紅;彭開松;涂健;劉紅梅;陳玎玎;張明;付瑞燕;薛秀恒 | 申請（專利權）人： | 安徽農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/12 | 分類號： | C12N15/12;C12N15/74;C12N1/21;C12P21/02;C07K14/47;C12R1/46 |
| 代理公司： | 安徽匯樸律師事務所 34116 | 代理人： | 胡敏 |
| 地址： | 230001 *** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 防御 avbd6 基因 及其 乳酸菌 載體 構建 方法 | ||
1.一種雞β-防御素AvBD6基因，即Op-AvBD6，其特征在于，其基因序列如序列表所示。
2.根據權利要求1所述的雞β-防御素AvBD6基因，其特征在于，所述雞β-防御素AvBD6基因是將雞AvBD6基因的稀有密碼子agg、cgg、tgc等優化為偏愛密碼子cgt、tgt而成。
3.一種雞β-防御素AvBD6基因乳酸菌載體的構建方法，其特征在于，步驟包括：
（1）對載體pNZ8148、Op-AvBD6進行雙酶切；
（2）回收酶切產物，經DNA?Ligation?Kit連接后電轉化到Lactococcus?lactis?NZ9000中；
（3）經氯霉素篩選、PCR鑒定，雙酶切鑒定后得到目的產物。
4.根據權利要求3所述的雞β-防御素AvBD6基因乳酸菌載體的構建方法，其特征在于，所述步驟（2）中電轉化處理參數為2.5kV、25μF、200Ω、5ms。
5.根據權利要求3所述的雞β-防御素AvBD6基因乳酸菌載體的構建方法，其特征在于，所述步驟（1）中載體pNZ8148、Op-AvBD6是使用限制性酶NcoI和XbaI進行雙酶切的。
6.一種雞β-防御素AvBD6基因乳酸菌載體的誘導表達方法，其特征在于，步驟包括：
（1）將測序正確的陽性雞β-防御素AvBD6基因乳酸菌載體菌落接種于GM17液體培養基中；
（2）待菌液OD600值達到0.4～0.5時加入Nisin，30℃誘導4h；
（3）離心收集菌體即誘導表達后的AvBD6重組乳酸菌，將菌體用溶菌酶破碎后離心取上清液；
7.根據權利要求6所述的雞β-防御素AvBD6基因乳酸菌載體的誘導表達方法，其特征在于，其使用方法為：所述誘導表達后的AvBD6重組乳酸菌的菌液濃度調節至5×108CFU/mL，在第一周按1：50的比例加入雛雞的飲水中，從第二周開始按1：25的比例加入雛雞的飲水中。
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