[發明專利]觀賞海棠花色苷的測定方法

有效

• 申請號: 201310487972.3
• 申請日: 2013-10-17
• 公開（公告）號: CN103499659A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發明（設計）人: 姚允聰;宋婷婷;張杰;田佶;秦曉曉
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14
• 代理公司: 北京凱特來知識產權代理有限公司 11260
• 代理人: 鄭立明;趙鎮勇

技術領域

本發明涉及針對花卉的檢測方法，特別是涉及一種用于測定觀賞海棠花的色苷的檢測方法。

背景技術

花青素是廣泛存在于被子植物中的一類重要的類黃酮化合物，它是植物花朵，葉片和果實色澤形成的重要的物質基礎之一。在自然界中，花青素常與不同種類的糖苷相結合，以花色苷的形式存在于植物中。關于植物體內成色物質的研究開始于19世紀中葉，至今已發現了很多種色素，但都可以歸成下述三大類色素：類胡蘿卜素(carotenoid)、生物堿類色素（alkaloid）和類黃酮（flavonoid）。類胡蘿卜素是胡蘿卜素（carotenes）和葉黃素（carotol）的統稱，類胡蘿卜素中所含的共軛雙鍵構成生色團，表現出黃、橙、紅、紫等顏色（參考：Goodwin?T?W,Britton?C.Dostribution?and?analysis?of?carotenoids.In:Goodwin?T?W?ed.Plant?Pigments,1988,61-132.Academic?Press,London.）。生物堿類色素（alkaloid）是含負氧化態氮原子的環狀有機物，生物堿色素包括甜菜堿(betaine)、嬰粟堿(papaverine)、小巢堿(berberine)等；嬰粟堿使嬰粟屬(Papaver)和綠絨篙屬(Meconopssi)的花表現黃色；小聚堿即黃連素，使小璧屬(Berberis)的花表現深橙色或黃色。（參考文獻：鄭志亮.1994.花卉作物的花色基因工程.北方園藝,(3)，37一38.）

）類黃酮（flavonoid）是一類具有黃烷核基本骨架（C6-C3-C6）的低分子量多酚化合物的總稱，是色原酮（Chromone）或色原烷（chromane）的衍生物。根據類黃酮物質單體化學結構可以分為四大類：黃酮（flavone)、黃烷酮(flavanone)、黃酮醇(flavono1)和花色苷（anthocyanin）。其中，花色苷(anthocyanins)是最重要的類黃酮類色素，也是植物呈現紅、粉、紫、藍等不同顏色的主要決定因素。大約88%的被子科植物花的顏色改變是由花色苷所決定的。

1978年，隨著Wulf和Nagel第一次使用液相色譜對葡萄品種“赤霞珠”果皮中的花青素種類進行分離和鑒定，開創了花青素色譜研究的新紀元。高效液相色譜法檢測植物中花青素的含量，具有進樣量少，分析效率較高，分析時間短，靈敏度較高，檢測完流出的組分可回收利用等系列有點。近年來，隨著各種不同類型檢測器的進一步應用，植物中各種類黃酮物質被成功地鑒定出來（參考文獻：Jia?N,Shu?QY,Wang?LS,et?al.2008.Analysis?of?petal?anthocyanins?to?investigate?coloration?mechanism?in?herbaceous?peony?cultivars.Sci.Hortic(Amsterdam).117:167-173.）。例如：根據不同的類黃酮具有不同吸收光譜這一原理，可以采用帶有光電二極管陣列檢測器（DAD）的HPLC對分離的類黃酮成分進行全波長掃描，然后用獲得的吸收光譜與標準品對照來鑒定類黃酮的化學結構。但現有的花色苷提取方法中，得到葉片制成的粉末，并加入花色苷提取液后形成的樣品，要將樣品于4℃冰箱內避光浸提72小時；期間每六小時震蕩一次，于24小時，48小時處收集上清液，并再向樣品中加入等量花色苷提取液；72小時后，將3次收集的上清液進行合并，這樣提取液必須長時間（過夜）浸泡植物材料而影響測定結果不準確的問題。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種觀賞海棠花色苷的測定方法，能在一天之內準確測定觀賞海棠花色苷的含量，從而解決目前對觀賞海棠花色苷含量測定時，

解決上述技術問題的技術方案如下：

本發明提供一種觀賞海棠花色苷的測定方法，包括：

步驟1，將經液氮速凍后的觀賞海棠花葉片放入研缽中，加入石英砂和非溶性交聯聚乙烯吡咯烷酮，加入液氮研磨成粉末；

步驟2，將所述粉末轉入試管中，加入花色苷提取液，之后在45℃超聲提取60min得到；

步驟3，將提取的所述花色苷提取液進行純化處理，12000轉/分鐘離心3min，得到上清液裝于安捷倫上樣瓶中用于HPLC檢測；