[發明專利]一種基于毛囊干細胞和硅凝膠敷料的皮膚重建方法

有效

• 申請號: 201310487717.9
• 申請日: 2013-10-17
• 公開（公告）號: CN103550828A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 段恩奎;趙華山;張會閃;張守兵;喬靜巧
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/60
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮

1.一種皮膚重建的方法，所述方法以毛囊干細胞為種子細胞，以硅凝膠敷料作為細胞移植載體進行皮膚重建，包括以下步驟：

1）培養擴增毛囊干細胞；

2）培養真皮細胞；

3）將步驟1）培養擴增的毛囊干細胞與步驟2）培養的真皮細胞混合；

4）將步驟3）的混合細胞滴加于硅凝膠敷料上孵育；

5）將步驟4）的細胞和硅凝膠敷料移植到需要皮膚重建的部位。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述步驟1）中的毛囊干細胞來源于哺乳動物毛囊隆突部，優選為大鼠觸須。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中將所述步驟1）中的毛囊干細胞和成纖維細胞按2∶1-1∶2的比例接種到培養皿中培養；

優選地，所述步驟1）中的毛囊干細胞和成纖維細胞按1∶1的比例接種到培養皿中培養。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述毛囊干細胞是利用器官培養的方法，采用William’s?E完全培養基對毛囊進行培養并分離純化而制備的。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述步驟2）中的真皮細胞來源于新生大鼠，優選24小時內出生的新生大鼠。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其中步驟3）還包括在混合前，將毛囊干細胞和真皮細胞分別使用DMEM/F12重懸的步驟；

優選地，步驟3）還包括混勻后，加入基質膠的步驟；優選地，所述基質膠在冰上溶解；優選地，將所述基質膠與細胞混合液按體積比1∶2-1∶4混合；更優選地，所述基質膠與細胞混合液的體積之比為1∶3；

優選地，所述步驟3）中毛囊干細胞和真皮細胞的混合比例為1∶1-1∶10，更優選1∶4-1∶6，最優選1∶5。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中將所述步驟5）中的重懸液吹成膠凍狀；優選地，在超凈工作臺中以0.2-0.5m/s的風速將所述重懸液吹15-25分鐘至形成膠凍狀即可，優選地，所述風速為0.3m/s。

8.根據權利要求1-7中任一項所述的方法，其中所述硅凝膠敷料為醫用自粘性硅凝膠敷料，所述醫用自粘性硅凝膠敷料優選為醫用自粘性硅凝膠膜或醫用自粘性硅凝膠貼；

優選地，步驟5）中使用醫用粘合劑將硅凝膠敷料與需要皮膚重建的部位粘合；優選地，所述粘合劑為軟組織醫用粘合劑，優選地，所述醫用粘合劑為α-氰基丙烯酸正丁酯。

9.根據權利要求1-8中任一項所述的方法，其中，所述方法還包括用綠色熒光蛋白標記毛囊干細胞的步驟；優選地，所述綠色熒光蛋白標記毛囊干細胞是通過慢病毒感染法。

10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法重建的皮膚類產品。

11.根據權利要求10所述的皮膚類產品在制備用于治療皮膚損傷的產品中的用途，優選地，所述皮膚損傷包括燒傷或燙傷。