[發明專利]肺癌標記物分子的快速體外檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201310486121.7
• 申請日: 2013-10-16
• 公開（公告）號: CN103513034A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 成曉亮;季軍;馬銀法
• 申請（專利權）人: 江蘇禾爾思生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 汪旭東

技術領域

本發明涉及一組癌癥標記物分子的檢測試劑盒,屬于生物醫藥技術領域，尤其涉及癌癥早期分子診斷。

背景技術

肺癌是發病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來許多國家都報道肺癌的發病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明確，大量資料表明，長期大量吸煙與肺癌的發生有非常密切的關系。已有的研究證明：長期大量吸煙者患肺癌的概率是不吸煙者的10～20倍，開始吸煙的年齡越小，患肺癌的幾率越高。此外，吸煙不僅直接影響本人的身體健康，還對周圍人群的健康產生不良影響，導致被動吸煙者肺癌患病率明顯增加。

和其他許多癌癥類似，肺癌的發生源于癌基因的激活，或抑癌基因的喪失活性。癌基因指的是那些使人容易得癌癥的基因。通常認為原癌基因在遇到致癌物以后會變成癌基因。大鼠肉瘤蛋白(RAS)原癌基因的基因突變大約造10-30%肺腺癌。表皮生長因子受體(EGFR)控制著細胞的分裂，凋零，抑制血管生成，和腫瘤侵蝕EGFR基因突變和擴增在非小細胞肺癌中很常見，因此才有采用EGFR抑制劑的治療基礎。但Her2/neu蛋白很少受影響。染色體損傷會導致基因雜合缺失。這可造成抑癌基因喪失活性。在小細胞肺癌中，經常見到3p，5q，13q，和17p染色體損傷。60-75%的病例在17p染色體上p53抑癌基因受影響。其他經常發生突變和擴增的基因有c-MET,NKX2-1,LKB1,PIK3CA,和BRAF多種基因多態性和肺癌有關，包括白細胞介素-1，細胞色素P450，細胞凋亡的促進因子(比如caspase-8)，和DNA修復分子(比如XRCC1)。有這些基因多態性的人在接觸致癌物質后更容易得肺癌。

目前對肺癌的診斷主要是通過影像學的應用,例如X線檢查,通過X線檢查可以了解肺癌的部位和大小，可能看到由于支氣管阻塞引起的局部肺氣腫、肺不張或病灶鄰近部位的浸潤性病變或肺部炎變。支氣管鏡檢查,通過支氣管鏡可直接窺察支氣管內膜及管腔的病變情況。可采取腫瘤組織供病理檢查，或吸取支氣管分泌物作細胞學檢查，以明確診斷和判定組織學類型。細胞學檢查痰細胞學檢查是肺癌普查和診斷的一種簡便有效的方法，原發性肺癌病人多數在痰液中可找到脫落的癌細胞。中央型肺癌痰細胞學檢查的陽性率可達70%～90%，周圍型肺癌痰檢的陽性率則僅約50%。剖胸探查術,肺部腫塊經多種檢查和短期診斷性治療仍未能明確病變性質，肺癌的可能性又不能除外者，應作剖胸探查術。這樣可避免延誤病情致使肺癌患者失去早期治療的機會。ECT檢,ECT骨顯像可以較早地發現骨轉移灶。X線片與骨顯像都有陽性發現，如病灶部成骨反應靜止，代謝不活躍，則骨顯像為陰性，X線片為陽性，二者互補，可以提高診斷率。需要注意的是ECT骨顯像診斷肺癌骨轉移的假陽性率可達20%～30%，因此ECT骨顯像陽性者需要作陽性區域骨的MRI掃描。縱隔鏡檢查,縱隔鏡檢查主要用于伴有縱隔淋巴結轉移，不適合于外科手術治療，而其他方法又不能獲得病理診斷的病人。縱隔鏡檢查需在全麻下進行。在胸骨上凹部做橫切口，鈍性分離頸前軟組織到達氣管前間隙，鈍性游離出氣管前通道，置入觀察鏡緩慢通過無名動脈之后方，觀察氣管旁、氣管支氣管角及隆突下等部位的腫大淋巴結，用特制活檢鉗解剖剝離取得淋巴結組織送病理學檢查。

癌癥發生時，某些生理指標以及全細胞，會在任一特定的組織或流通。檢測的生物標志物，單獨或作為較大的數據集或圖案，可以通過各種各樣的方法，包括從血液或組織樣品的生化分析，生物醫學成像。

蝶啶癌癥篩選研究在過去的二十年中成為焦點，蝶啶水平要顯著升高時，細胞免疫系統被激活的某些疾病，如癌癥，病毒感染，和腎臟病已報告。在腫瘤相關的疾病中不同的蝶啶衍生物可以扮演各種角色。每種類型的腫瘤很可能會導致不同模式的蝶啶濃度的變化。因為目標蝶啶水平已被證明反映不同的的癌癥患者代謝產物中。本發明使用高效毛細管電泳－激光誘導熒光的檢測方法，開發了一些列診斷試劑盒和配套標準試劑,來分析肺癌患者及健康人體尿樣中黃蝶呤。高性能液相色譜（HPLC）的方法已被用于黃蝶呤分析。但是,它費時昂貴，并導致了不能令人滿意的分離，尤其是對真實的尿液樣本,從而影響檢測的準確率和靈敏度。另一方面，高效毛細管電泳法（HPCE）是快速而有效的，只需要一個小的樣本大小。此專利開發并優化了高效毛細管電泳-激光誘導熒光的檢測方法來定量分析尿樣中的黃蝶呤。

目前針對蝶呤類分子檢測的手段多使用高性能液相色譜(HPLC)和高性能液相色譜連用質譜(LC-MS).無論是HPLC或者LC-MS,有以下缺點：