[發明專利]檢測結核分枝桿菌的方法及量子點標記免疫層析試紙及其制備方法

無效

• 申請號: 201310485263.1
• 申請日: 2013-10-16
• 公開（公告）號: CN103529203A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 文德敏;申有長;于曉永
• 申請（專利權）人: 北京華衛博沃生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/533
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 吳甘棠

1.一種量子點標記免疫層析試紙，其特征在于，設有塑料板、硝酸纖維素膜、玻璃纖維素膜A、量子點標記結核分枝桿菌IgG單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、吸水紙；

其中，所述塑料板上從下到上依次粘貼有玻璃纖維素膜A、量子點標記結核分枝桿菌IgG單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、硝酸纖維素膜、吸水紙；

其中，所述硝酸纖維素膜一端有結核分枝桿菌多克隆抗體和兔抗鼠二抗，以此形成檢測帶T和質控帶C；

其中，所述量子點標記的結核分枝桿菌IgG單克隆抗體位于玻璃纖維素膜B的一端，與檢測帶T和質控帶C相對應，并且量子點標記的結核分枝桿菌IgG單克隆抗體位于進樣點一端。

2.如權利要求1所述的量子點標記免疫層析試紙，其特征在于，所述量子點為CdTe/ZnSe核殼量子點。

3.如權利要求1所述的量子點標記免疫層析試紙，其特征在于，所述塑料板為粘性PVC底板。

4.如權利要求1所述的量子點標記免疫層析試紙，其特征在于，所述結核分枝桿菌多克隆抗體的濃度為0.5g/L。

5.如權利要求1所述的量子點標記免疫層析試紙，其特征在于，所述兔抗鼠二抗的濃度為1.0g/L。

6.如權利要求1所述的量子點標記免疫層析試紙，其特征在于，所述檢測帶T和質控帶C間距不少于5mm。

7.如上任意一項權利要求所述的量子點標記免疫層析試紙的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）量子點與結核分枝桿菌IgG單克隆抗體的偶聯：

取0.01M的PBS緩沖液100～200uL與5～20uL表面連有羧基的量子點；

選取偶聯試劑；

加入結核分枝桿菌IgG單克隆抗體150～200uL；

搖床反應1～4小時；

層析柱過濾，離心純化；

用1%～5%的牛血清白蛋白封閉；

4℃保存；

（2）試紙的制備：

用0.05～0.15M的PBS緩沖液稀釋結核分枝桿菌多克隆抗體及兔抗鼠二抗，將0.5g/L結核分枝桿菌多克隆抗體和1.0g/L兔抗鼠二抗噴在硝酸纖維素膜一端，形成檢測帶T和質控帶C，T帶和C帶間隔5mm，室溫晾干，將硝酸纖維素膜放入PBS緩沖液中，37℃封閉待用，或者干燥后4℃保存；

將量子點標記的結核分枝桿菌IgG單克隆抗體均勻噴覆于玻璃纖維膜B一端，與檢測帶T和質控帶C相對應，并且量子點標記的結核分枝桿菌IgG單克隆抗體位于進樣點一端，室溫干燥，4℃保存；

在塑料板上依次粘帖玻璃纖維素膜A、量子點標記結核分枝桿菌IgG單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、硝酸纖維素膜、吸水紙；

用試紙切刀切割成試紙，干燥后密封保存。

8.如權利要求7所述的量子點標記免疫層析試紙的制備方法，其特征在于，步驟（1）中的偶聯試劑選自羥基硫代琥珀酸亞胺、1-（3-二甲基氨丙基）-3乙基碳二胺鹽酸鹽。

9.用權利要求1-6任意一項所述的試紙檢測結核分枝桿菌，其特征在于，包括如下步驟：將樣品點樣在組裝好的試紙上接近結核分枝桿菌IgG單克隆抗體的一端，反應5min后，在紫外分析儀中觀察結果。