[發(fā)明專利]檢測(cè)風(fēng)疹病毒的方法及量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310484759.7
• 申請(qǐng)日: 2013-10-16
• 公開（公告）號(hào): CN103529211A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 文德敏;申有長(zhǎng);于曉永
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京華衛(wèi)天和生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 北京匯信合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11335
• 代理人: 吳甘棠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)免疫檢測(cè)方法，特別是涉及使用量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙，以免疫學(xué)的方法檢測(cè)風(fēng)疹病毒的方法。

背景技術(shù)

風(fēng)疹病毒為RNA病毒，屬于披蓋病毒屬。風(fēng)疹病毒多克隆抗體結(jié)構(gòu)相當(dāng)穩(wěn)定，只有一種多克隆抗體型，無(wú)亞型。只感染人類，能在兔腎、乳田鼠腎及綠猴腎細(xì)胞生長(zhǎng)。外形呈粗糙球狀，直徑50～70nm，由一單股RNA基因組及脂質(zhì)外殼組成，內(nèi)含一個(gè)電子致密核心，覆蓋兩層疏松外衣。病毒不耐熱，在37℃和室溫中很快失去活力，耐寒，-20℃可短期保存，-60℃可相對(duì)穩(wěn)定保存幾個(gè)月。在人體外生活力較弱，對(duì)消毒劑敏感。出疹前及疹退后5天，在患兒的鼻咽部分泌物中可發(fā)現(xiàn)病毒。

目前，常用的檢測(cè)方法是膠體金法，此法雖然檢測(cè)快速簡(jiǎn)便，容易操作，但是準(zhǔn)確率較低，靈敏度也較低。因此尋求一種價(jià)格便宜、操作簡(jiǎn)便、靈敏度和特異性都較高的檢測(cè)方法是迫切需要解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述技術(shù)的不足之處，本發(fā)明提供一種價(jià)格便宜、操作簡(jiǎn)便、靈敏度和特異性都較高的檢測(cè)試紙以及用該試紙檢測(cè)風(fēng)疹病毒的方法。

一種量子點(diǎn)標(biāo)記免疫層析試紙，設(shè)有塑料板、硝酸纖維素膜、玻璃纖維素膜A、量子點(diǎn)標(biāo)記風(fēng)疹病毒IgG單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、吸水紙；

其中，所述塑料板上依次粘貼有玻璃纖維素膜A、量子點(diǎn)標(biāo)記風(fēng)疹病毒IgG單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、硝酸纖維素膜、吸水紙；

其中，所述硝酸纖維素膜一端有風(fēng)疹病毒多克隆抗體和兔抗鼠二抗，以此形成檢測(cè)帶T和質(zhì)控帶C；

其中，所述量子點(diǎn)標(biāo)記的風(fēng)疹病毒IgG單克隆抗體位于玻璃纖維素膜B的另一端，與檢測(cè)帶T和質(zhì)控帶C相對(duì)應(yīng)，并且量子點(diǎn)標(biāo)記的風(fēng)疹病毒IgG單克隆抗體位于進(jìn)樣點(diǎn)一端。

優(yōu)選的，所述量子點(diǎn)為CdTe/ZnSe核殼量子點(diǎn)。

優(yōu)選的，所述塑料板為粘性PVC底板。

優(yōu)選的，所述風(fēng)疹病毒多克隆抗體的濃度為0.5g/L。

優(yōu)選的，所述兔抗鼠二抗的濃度為1.0g/L。

優(yōu)選的，所述檢測(cè)帶T和質(zhì)控帶C間距不少于5mm。

如上所述的試紙的制備方法，包括如下步驟：

（1）量子點(diǎn)與風(fēng)疹病毒IgG單克隆抗體的偶聯(lián)：

取0.01M的PBS緩沖液100～200uL與5～20uL表面連有羧基的量子點(diǎn)；

選取偶聯(lián)試劑，偶聯(lián)試劑選自羥基硫代琥珀酸亞胺、1-（3-二甲基氨丙基）-3乙基碳二胺鹽酸鹽；

加入風(fēng)疹病毒IgG單克隆抗體150～200uL；

搖床反應(yīng)1～4小時(shí)；

層析柱過濾，離心純化；

用1%～5%的牛血清白蛋白封閉；

4℃保存；

（2）試紙的制備：

用0.05～0.15M的PBS緩沖液稀釋風(fēng)疹病毒多克隆抗體及兔抗鼠二抗，將0.5g/L風(fēng)疹病毒多克隆抗體和1.0g/L兔抗鼠二抗噴在硝酸纖維素膜一端，形成檢測(cè)帶T和質(zhì)控帶C，T帶和C帶間隔5mm，室溫晾干，將硝酸纖維素膜放入PBS緩沖液中，37℃封閉待用，或者干燥后4℃保存；

將量子點(diǎn)標(biāo)記風(fēng)疹病毒IgG單克隆抗體均勻噴覆于玻璃纖維膜B一端，與形成的T帶和C帶相對(duì)應(yīng)，室溫干燥，4℃保存；

在塑料板上依次粘帖玻璃纖維素膜A、量子點(diǎn)標(biāo)記風(fēng)疹病毒IgG單克隆抗體的玻璃纖維素膜B、硝酸纖維素膜、吸水紙；

用試紙切刀切割成試紙，干燥后密封保存。

用所述的試紙檢測(cè)風(fēng)疹病毒，包括如下步驟：與檢將樣品點(diǎn)樣在組裝好的試紙上接近風(fēng)疹病毒IgG單克隆抗體的一端，反應(yīng)5min后，在紫外分析儀中觀察結(jié)果。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：由于在所制備的試紙中加入了核殼量子點(diǎn)，特別是采用了CdTe/ZnSe水溶性核殼量子點(diǎn)，將水溶性的量子點(diǎn)與特異性的通過共價(jià)偶聯(lián)，然后利用雙抗夾心原理結(jié)合量子點(diǎn)的熒光性質(zhì)檢測(cè)樣品中是否含有目標(biāo)物。在紫外燈的照射下，通過觀察免疫層析試紙條上檢測(cè)帶和質(zhì)控帶的熒光線，判斷檢測(cè)結(jié)果。本發(fā)明將免疫反應(yīng)的高特異性和量子點(diǎn)的熒光特性相結(jié)合，利用量子點(diǎn)多波長(zhǎng)激發(fā)，高強(qiáng)度熒光發(fā)射，發(fā)射峰窄，峰形對(duì)稱，發(fā)光穩(wěn)定性好的熒光特性，建立了快速，特異，簡(jiǎn)便，靈敏的免疫層析檢測(cè)方法。通過觀察熒光信號(hào)達(dá)到了定量檢測(cè)的目的。該方法的檢測(cè)靈敏度比目前常用的一種快速檢測(cè)方法-膠體金的檢測(cè)靈敏度高約1000倍左右。

附圖說(shuō)明

圖1為試紙制備的工藝流程圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。