[發明專利]一種適用于阪崎腸桿菌實時熒光定量PCR檢測的質粒標準分子

無效

• 申請號: 201310483387.6
• 申請日: 2013-10-15
• 公開（公告）號: CN103484557A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 許麗;劉剛;李蘭英;梁文;李妍;徐勤;聞艷麗
• 申請（專利權）人: 上海市計量測試技術研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/63;C12N15/66
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 朱水平;沈利

1.一種阪崎腸桿菌的質粒標準分子，其特征在于，該質粒標準分子包含阪崎腸桿菌的大分子合成操縱子基因序列，所述大分子合成操縱子基因序列如序列表中SEQ?ID?NO：1所示。

2.一種阪崎腸桿菌的質粒標準分子，其特征在于，該質粒標準分子的序列如序列表中SEQ?ID?NO：2所示。

3.一種如權利要求1或2所述阪崎腸桿菌的質粒標準分子的定量方法，其特征在于，其包括以下步驟：

①提取質粒標準分子；

②根據步驟①所得的質粒標準分子的堿基組成和序列長度，計算質粒標準分子中的磷元素的含量；

③配制梯度濃度的磷標準溶液，并用此標準溶液作出高分辨電感耦合等離子體發射質譜的標準曲線；

④高分辨電感耦合等離子體發射質譜檢測質粒標準分子溶液，并根據步驟③所得的標準曲線得出質粒標準分子溶液的磷含量；

⑤根據步驟④所得的質粒標準分子溶液的磷含量和步驟②所得的質粒標準分子中的磷元素的含量，計算出質粒標準分子的濃度。

4.如權利要求3所述阪崎腸桿菌的質粒標準分子的定量方法，其特征在于，步驟③所述高分辨電感耦合等離子體發射質譜檢測的條件為：冷卻氣流量為10L/min～25L/min，輔助氣流量為0.5L/min～3.0L/min，霧化氣流量為0.5L/min～1.5L/min，功率為1200W～1400W。

5.如權利要求3所述阪崎腸桿菌的質粒標準分子的定量方法，其特征在于，步驟③所述高分辨電感耦合等離子體發射質譜檢測的條件為：冷卻氣流量為16.86L/min，輔助氣流量為0.88L/min，霧化氣流量為1.123L/min，功率為1350W。

6.一種阪崎腸桿菌實時熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，所采用的標準物質是如權利要求1或2所述的質粒標準分子。

7.如權利要求1或2所述的質粒標準分子在阪崎腸桿菌實時熒光定量PCR檢測中的應用。

8.一種如權利要求1或2所述的阪崎腸桿菌的質粒標準分子的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

①人工合成阪崎腸桿菌的大分子合成操縱子基因序列，所述大分子合成操縱子基因序列如序列表中SEQ?ID?NO：1所示；

②將步驟①所得阪崎腸桿菌的大分子合成操縱子基因序列克隆至克隆載體上，得到阪崎腸桿菌的質粒標準分子。

9.如權利要求8所述的阪崎腸桿菌的質粒標準分子的制備方法，其特征在于，步驟②所述克隆載體為pUC19，pUC18，pUC118，pUC119，pBlueScript?II?SK或pGEM。

10.如權利要求8所述的阪崎腸桿菌的質粒標準分子的制備方法，其特征在于，步驟②所述克隆載體為pUC19。