[發(fā)明專利]子宮內(nèi)膜癌基因檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310482915.6
• 申請日: 2013-10-16
• 公開（公告）號: CN103865996A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李輝
• 申請（專利權(quán)）人: 李輝
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是用于對子宮內(nèi)膜組織標本，涉及應(yīng)用涉及基于PTEN突變位點的相關(guān)核苷酸序列、引物和探針，對子宮內(nèi)膜癌檢測的子宮內(nèi)膜癌檢測試劑盒。

背景技術(shù)

子宮內(nèi)膜癌原發(fā)于子宮內(nèi)膜，是女性三大常見惡性腫瘤之一。近數(shù)年來子宮內(nèi)膜惡性腫瘤已超過宮頸癌成為女性生殖系統(tǒng)最常見的侵襲性惡性腫瘤。一般該病只有在婦女出現(xiàn)不規(guī)則出血等癥狀進行相關(guān)疾病的檢查時才實施檢查。從而導致絕大多數(shù)因處于病變早期而無臨床癥狀的患者不易發(fā)現(xiàn)，而一旦被發(fā)現(xiàn)，其診斷分期較晚存活率較低，因此在無癥狀人群中進行篩查以發(fā)現(xiàn)癌前病變和早期癌癥具有重要意義。

以往的子宮內(nèi)膜癌疾病的篩查往往需要在顯微鏡下觀察數(shù)以萬計的組織切片，并對細胞內(nèi)部組成、細胞形態(tài)及行為、細胞群體特性等進行分析。針對現(xiàn)有問題，我公司基于多年來與醫(yī)療機構(gòu)配合從事子宮內(nèi)膜癌篩查工作及與醫(yī)務(wù)人員的溝通認識到子宮內(nèi)膜癌是一類多基因病，其發(fā)展過程復雜，臨床表現(xiàn)多樣，涉及到多個基因的變化并與多種因素有關(guān)，由于激素替代治療的廣泛應(yīng)用，發(fā)病率逐年上升，但其發(fā)病機制尚未完全闡明。研究表明，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與某些原癌基因的激活及抗癌基因的失活有關(guān)。臨床醫(yī)學需要一種簡便易行的對采集到的子宮內(nèi)膜細胞組織進行快速基因診斷方法。

目前相關(guān)對于子宮內(nèi)膜癌檢測的專利有多種方式。如蛋白表達水品的：“子宮內(nèi)膜癌的檢測”公開號：CN1257550A，“子宮內(nèi)膜癌診斷試劑、試劑盒及防治藥物”公開號：CN101261279A、CN101261279B；通過子宮洗液進行或口腔標本進行檢測的，如“子宮內(nèi)膜癌的標記物”公開號：CN102549169A，“子宮內(nèi)膜癌易感基因無創(chuàng)檢測試劑盒”公開號：CN102559903A及其他基因檢測位點檢測發(fā)明，且所涉及的基因位點與本發(fā)明涉及的位點不同。

以上多種發(fā)明，因其他位點標本經(jīng)過人體內(nèi)多重循環(huán)，可能會因涉及過程較多，對結(jié)果判定造成的誤差；及目前子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機理未明確，需要一種準確性更高的檢測方法，使的子宮內(nèi)膜癌能更早期的被檢測出來。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的：為了研發(fā)一種可以直接針對醫(yī)療機構(gòu)采集到的子宮內(nèi)膜組織標本，進行子宮內(nèi)膜癌的檢查，以早期檢查出標本供體是否患有子宮內(nèi)膜癌。使得潛在子宮內(nèi)膜癌患者及時得到有效確診，得到救治。

本發(fā)明具體實施方案：本發(fā)明采用分子生物學的診斷方法，取得樣品后對相應(yīng)位點進行聚合酶鏈式擴增(PCR)獲得大量產(chǎn)物后，進行測序，分析結(jié)果。組成包括：診斷試劑+使用方法說明

本發(fā)明的組成部分一診斷試劑：包括PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))所需的酶、緩沖液、目標引物與相關(guān)反應(yīng)體系。PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))是DNA的體外復制過程，利用DNA在體外95度時解旋，35度時引物與單鏈按堿基互補配對結(jié)合，再調(diào)溫度至65度左右DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5′-3′)的方向合成互補鏈。得到大量的目標基因。

本發(fā)明的組成部分-使用方法說明：包括對石蠟標本、保存液保存的子宮內(nèi)膜脫落細胞種樣本形態(tài)的預處理方法、基因提取方法參數(shù)；PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))時間、溫度等參數(shù)；判定目標基因的測序結(jié)果依據(jù)。

經(jīng)前期實驗驗證，深入比對發(fā)現(xiàn)PTEN?c.946C＞T這個點突變并不導致氨基酸的改變，但在子宮內(nèi)膜癌組中檢出率高達83％，在子宮內(nèi)膜增殖組中沒有發(fā)現(xiàn)任何程度的樣本的突變，特異性高達100％，能用來提示子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。

目標基因位點選取：PTENNM_000314.4c.946C＞T為子宮內(nèi)膜癌篩查位點。

應(yīng)對目標基因位點的特異性變化，使用專門針對其研制的引物片段，使得目標片段大量擴增，便于后期檢測。

通過對標本基因的PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))取得的大量目標片段進行基因測序，判定其基因序列是否與標準序列相同。

【0024】本發(fā)明與同類的類似相比，本發(fā)明直接采用子宮內(nèi)膜標本作為檢測源，直接選取病發(fā)部位的組織標本，使得檢測結(jié)果更少的收到干擾。如采取其他標本方式，例如宮腔洗液、外周血液，可能會因機體其他部位的病變、機體代謝等因素，使得檢測結(jié)果受到干擾，不能明確病變種類或因代謝轉(zhuǎn)變使得未能檢出病變。

本發(fā)明所在產(chǎn)品實現(xiàn)中使用到的標本基因提取、PCR擴增、基因檢測的方法、過程、設(shè)備等都在國內(nèi)有一定的基礎(chǔ)，自動化程度較高，技術(shù)成熟。