[發明專利]一種適用于阪崎腸桿菌實時熒光定量PCR檢測的質粒標準分子無效
| 申請號： | 201310482883.X | 申請日： | 2013-10-15 |
| 公開（公告）號： | CN103497963A | 公開（公告）日： | 2014-01-08 |
| 發明（設計）人： | 許麗;劉剛;李蘭英;梁文;李妍;徐勤;聞艷麗 | 申請（專利權）人： | 上海市計量測試技術研究院 |
| 主分類號： | C12N15/63 | 分類號： | C12N15/63;C12N15/31;C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海弼興律師事務所 31283 | 代理人： | 朱水平;沈利 |
| 地址： | 201203 上*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 適用于 阪崎腸 桿菌 實時 熒光 定量 pcr 檢測 質粒 標準 分子 | ||
1.一種阪崎腸桿菌的質粒標準分子，其特征在于，該質粒標準分子包含阪崎腸桿菌的外膜蛋白基因（ompA）序列，所述外膜蛋白基因（ompA）序列如序列表中SEQ?ID?NO：1所示。
2.一種阪崎腸桿菌的質粒標準分子，其特征在于，該質粒標準分子的序列如序列表中SEQ?ID?NO：2所示。
3.一種如權利要求1或2所述阪崎腸桿菌的質粒標準分子的定量方法，其特征在于，其包括以下步驟：
①提取質粒標準分子；
②根據步驟①所得的質粒標準分子的堿基組成和序列長度，計算質粒標準分子中的磷元素的含量；
③配制梯度濃度的磷標準溶液，并用此標準溶液作出高分辨電感耦合等離子體發射質譜的標準曲線；
④高分辨電感耦合等離子體發射質譜檢測質粒標準分子溶液，并根據步驟③所得的標準曲線得出質粒標準分子溶液的磷含量；
⑤根據步驟④所得的質粒標準分子溶液的磷含量和步驟②所得的質粒標準分子中的磷元素的含量，計算出質粒標準分子的濃度。
4.如權利要求3所述阪崎腸桿菌的質粒標準分子的定量方法，其特征在于，步驟③所述高分辨電感耦合等離子體發射質譜檢測的條件為：冷卻氣流量為10L/min～25L/min，輔助氣流量為0.5L/min～3.0L/min，霧化氣流量為0.5L/min～1.5L/min，功率為1200W～1400W。
5.如權利要求3所述阪崎腸桿菌的質粒標準分子的定量方法，其特征在于，步驟③所述高分辨電感耦合等離子體發射質譜檢測的條件為：冷卻氣流量為16.86L/min，輔助氣流量為0.88L/min，霧化氣流量為1.123L/min，功率為1350W。
6.一種阪崎腸桿菌實時熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，所采用的標準物質是如權利要求1或2所述的質粒標準分子。
7.如權利要求1或2所述的質粒標準分子在阪崎腸桿菌實時熒光定量PCR檢測中的應用。
8.一種如權利要求1或2所述的阪崎腸桿菌的質粒標準分子的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
①人工合成阪崎腸桿菌的外膜蛋白基因（ompA）序列，所述外膜蛋白基因（ompA）序列如序列表中SEQ?ID?NO：1所示；
②將步驟①所得阪崎腸桿菌的外膜蛋白基因（ompA）序列克隆至克隆載體上，得到阪崎腸桿菌的質粒標準分子。
9.如權利要求8所述的阪崎腸桿菌的質粒標準分子的制備方法，其特征在于，步驟②所述克隆載體為pUC19，pUC18，pUC118，pUC119，pBlueScript?II?SK或pGEM。
10.如權利要求8所述的阪崎腸桿菌的質粒標準分子的制備方法，其特征在于，步驟②所述克隆載體為pUC19。
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