[發(fā)明專利]一種海藻酸－透明質(zhì)酸原位組織工程細(xì)胞支架及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310481647.6
• 申請日: 2013-10-15
• 公開（公告）號: CN103550830A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 位曉娟;奚廷斐;顧其勝;鄭玉峰
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號: A61L27/42
• 分類號: A61L27/42;A61L27/38;A61L27/26;A61L27/54
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種海藻酸－透明質(zhì)酸原位組織工程細(xì)胞支架的制備方法，包括以下步驟：

用生理鹽水或生理緩沖液分別將海藻酸或其衍生物和透明質(zhì)酸或其衍生物配成溶液，得到含海藻酸或其衍生物的溶液和含透明質(zhì)酸或其衍生物的溶液，將上述兩種溶液與所需載負(fù)的細(xì)胞混合后，室溫平衡一段時間后即得海藻酸－透明質(zhì)酸原位組織工程細(xì)胞支架。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

所述含海藻酸或其衍生物的溶液中，海藻酸或其衍生物的質(zhì)量體積百分濃度為0.5－5.0％；優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為1.5－5.0％；再優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為3.0－5.0％；最優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為3.0％、4.0％或5.0％；

所述含透明質(zhì)酸或其衍生物的溶液中，透明質(zhì)酸或其衍生物的質(zhì)量體積百分濃度為0.5－5.0％；優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為1.5－3.5％；再優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為2－3.5％；最優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為3.5％、2.5%或2.0%。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述含海藻酸或其衍生物的溶液與所述含透明質(zhì)酸或其衍生物的溶液的體積比為1：4—4：1；優(yōu)選的，體積比為1：3—3：1；再優(yōu)選的，體積比為1：3—2：1；最優(yōu)選的，體積比為1：3、1:2或2：1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：

所述海藻酸或其衍生物重均分子量為5－25萬Da；優(yōu)選的，重均分子量為12－15萬Da；最優(yōu)選的，重均分子量為15KD或12KD；

所述透明質(zhì)酸或其衍生物重均分子量為100－300萬Da；優(yōu)選的，重均分子量為150－250萬Da；最優(yōu)選的，重均分子量為200萬Da。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：

所述海藻酸或其衍生物包括海藻酸鈉、海藻酸鉀、海藻酸銨、海藻酸鈣或氧化醛基化海藻酸鈉中的任意一種物質(zhì)或兩種以上物質(zhì)的任意組合；

所述透明質(zhì)酸或其衍生物包括透明質(zhì)酸鈉、氧化醛基化透明質(zhì)酸鈉或硫化透明質(zhì)酸鈉中的任意一種物質(zhì)或兩種以上物質(zhì)的任意組合。

6.權(quán)利要求1-6任一所述方法制備得到的海藻酸－透明質(zhì)酸原位組織工程細(xì)胞支架。

7.海藻酸或其衍生物，和透明質(zhì)酸或其衍生物在制備原位組織工程細(xì)胞支架中的應(yīng)用；

或，海藻酸或其衍生物，和透明質(zhì)酸或其衍生物作為支架材料在制備原位組織工程中細(xì)胞支架中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：

所述海藻酸或其衍生物包括海藻酸鈉、海藻酸鉀、海藻酸銨、海藻酸鈣或氧化醛基化海藻酸鈉中的任意一種物質(zhì)或兩種以上物質(zhì)的任意組合；

所述透明質(zhì)酸或其衍生物包括透明質(zhì)酸鈉、氧化醛基化透明質(zhì)酸鈉或硫化透明質(zhì)酸中的任意一種物質(zhì)或兩種以上物質(zhì)的任意組合。

9.用于制備原位組織工程中細(xì)胞支架的材料，包含海藻酸或其衍生物，和透明質(zhì)酸或其衍生物。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的材料，其特征在于：

所述材料還包括說明書，所述說明書中記載有如下內(nèi)容：

使用前，用生理鹽水或生理緩沖液分別將海藻酸或其衍生物和透明質(zhì)酸或其衍生物配成溶液，得到含海藻酸或其衍生物的溶液和含透明質(zhì)酸或其衍生物的溶液，將上述兩種溶液與所需載負(fù)的細(xì)胞混合后，室溫平衡一段時間后即得海藻酸－透明質(zhì)酸原位組織工程細(xì)胞支架；

所述含海藻酸或其衍生物的溶液中，海藻酸或其衍生物的質(zhì)量體積百分濃度為0.5－5.0％；優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為1.5－5.0％；再優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為3.0－5.0％；最優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為3.0％、4.0％或5.0％；

所述含透明質(zhì)酸或其衍生物的溶液中，透明質(zhì)酸或其衍生物的質(zhì)量體積百分濃度為0.5－5.0％；優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為1.5－3.5％；再優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為2－3.5％；最優(yōu)選的，質(zhì)量體積百分濃度為3.5％、2.5%或2.0%；

所述生理鹽水或生理緩沖液為無菌無熱原的生理鹽水或生理緩沖液；

所述所需載負(fù)的細(xì)胞包括生物體所有組織的細(xì)胞；優(yōu)選軟組織細(xì)胞；再優(yōu)選軟骨組織的細(xì)胞；最優(yōu)選成骨細(xì)胞MC3T3-E1或心肌細(xì)胞H9C2；

所述混合的具體過程為：將上述兩種溶液中的任意一種與所需載負(fù)的細(xì)胞，灌裝入注射器中；將剩下的另外一種溶液灌裝入另外一只注射器中；將上述兩種溶液通過三通注射器混合；

所述含海藻酸或其衍生物的溶液與所述含透明質(zhì)酸或其衍生物的溶液的體積比為1：4—4：1；優(yōu)選的，體積比為1：3—3：1；再優(yōu)選的，體積比為1：3—2：1；最優(yōu)選的，體積比為1：3、1:2或2：1；

所述室溫平衡的時間為1－50min；優(yōu)選的，室溫平衡的時間為1-20min；再優(yōu)選的，室溫平衡的時間為3-5min；最優(yōu)選的，室溫平衡的時間為3min、4min或5min。