[發(fā)明專利]一種美味牛肝菌菌絲多糖的提取方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310480673.7
• 申請日: 2013-10-15
• 公開（公告）號: CN103554287A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設計）人: 陳朋;嚴曉娟;梁寧;胡先望
• 申請（專利權）人: 甘肅省商業(yè)科技研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A01G1/04
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

技術領域

本發(fā)明涉及真菌多糖技術領域，尤其涉及一種美味牛肝菌菌絲多糖的提取方法。?

背景技術

真菌多糖是從真菌子實體、菌絲體及發(fā)酵液中分離出的活性物質，具有調節(jié)機體免疫力、抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、抗輻射、降血脂、血糖和膽固醇、健胃護肝等多種藥理作用。真菌多糖的多種生物活性功能在臨床上的廣泛應用，使其已成為生命科學、生物學、醫(yī)學和食品科學等領域的研究熱點。?

美味牛肝菌（Boletus?edulis）屬于擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目、牛肝菌科中的一種與高等植物共生的外生菌根真菌，是一種藥、食兼用的珍稀食用菌。我國美味牛肝菌資源豐富，主要分布于河南、四川、云南、內蒙古、福建、陜西等地。研究表明，美味牛肝菌菌絲體中主要含有碳水化合物、粗蛋白、胞內多糖以及少量的脂類和纖維等成分，具有降低血脂，提高人體免疫力和明顯的抗癌作用。由于其優(yōu)良的食療保健功效，已成為我國出口創(chuàng)匯的重要菌類產品。美味牛肝菌多糖是一種有效的生物免疫調節(jié)劑，具有調節(jié)血糖、血脂及膽固醇水平、改善免疫系統(tǒng)功能以及顯著的抗腫瘤等作用。?

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種操作簡單、成本低、多糖得率高的美味牛肝菌菌絲多糖的提取方法。?

為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種美味牛肝菌菌絲多糖的提取方法，包括以下步驟：?

⑴制備馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基：將馬鈴薯洗凈去皮切碎，按其質量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾，得到濾液A，該濾液A補足至1.0L依次加入5~10g葡萄糖和5~10g瓊脂，使其pH值為6.0~8.0，在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝，在壓強為1.05Kg/cm²、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得；

⑵制備種子培養(yǎng)基：將馬鈴薯洗凈去皮切碎，按其質量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾，得到濾液B，該濾液B補足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值為6.0~8.0，在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝，在壓強為1.05Kg/cm²、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得；

⑶制備發(fā)酵培養(yǎng)基：將馬鈴薯洗凈去皮切碎，按其質量的4~6倍加水煮沸25~35min后用紗布過濾，得到濾液C，該濾液C補足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值為6.0~8.0，在90~100℃溫度下充分加熱溶解后分裝，在壓強為1.05Kg/cm²、溫度為121℃的條件下滅菌20min即得；

⑷真菌的發(fā)酵培養(yǎng)：接一環(huán)美味牛肝菌菌絲至所述馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基上，于28℃恒溫培養(yǎng)4~10天后，置于4℃冰箱中，得到活化培養(yǎng)后的菌絲體；

⑸接一環(huán)所述活化培養(yǎng)后的菌絲體至裝有10mL所述種子培養(yǎng)基的試管中，并置于恒溫振蕩器上，在28℃條件下以100~200?r/min的速率進行振蕩培養(yǎng)4~10天，制得pH值為5.0~7.0的菌種種子液；

⑹將所述菌種種子液按5~20%的接種量接種至含有所述發(fā)酵培養(yǎng)基的搖瓶中，并置于恒溫振蕩器上，在28℃條件下以100~200?r/min的速率進行振蕩培養(yǎng)4~10天，即得發(fā)酵液；所述發(fā)酵液在高速冷凍離心機中于5000r/min離心20min，得到菌絲體；所述菌絲體用蒸餾水洗滌后在真空干燥箱于60℃下烘干至恒重后磨成粉，得到菌絲體干粉末；所述發(fā)酵培養(yǎng)基在所述搖瓶中的裝瓶量為10~30%；

⑺在所述菌絲體干粉末中按1?g：5?mL?~20mL的料液比加入去離子水，在功率為100~300W的條件下超聲提取10~20?min后，在溫度為70~90℃的條件下浸提次數2~4次，每次1~3h，合并提取液，得到多糖浸提液；

⑻將所述多糖浸提液與正丁醇-三氯乙酸溶液按1mL：1mL的比例，充分混合，在轉速150?r/min條件下，振蕩15min，再靜置45min，用高速冷凍離心機4000r/min離心20min，除掉變性蛋白質，將水相再加入相當于其體積的正丁醇-三氯乙酸溶液，反復多次直到上清液與有機相中間有清晰的分界面為止，視為蛋白質除盡，即得多糖提取液；

⑼在所述多糖提取液中按其體積的2~4倍加入質量濃度為95%的乙醇，在4℃下靜置24h，得到沉淀物A；

⑽將所述沉淀物A經高速冷凍離心機以4000?r／min離心10?min后，得到沉淀物B，該沉淀物B經無水乙醇多次洗滌后置于真空干燥箱內，經50℃真空干燥至恒重，即得美味牛肝菌多糖。