[發(fā)明專利]一種惡臭假單胞菌株及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310479966.3
• 申請日: 2013-10-14
• 公開（公告）號: CN103484413A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王鵬;甄麗;鄭玉蓮
• 申請（專利權(quán)）人: 青島蔚藍(lán)生物集團有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C12R1/40
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種惡臭假單胞菌株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

近幾十年來，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，集約化、高密度養(yǎng)殖規(guī)模日益擴大。但由于養(yǎng)殖水體中積累大量的殘餌、糞便及動植物尸體，導(dǎo)致水體氮元素含量嚴(yán)重超標(biāo)，富營養(yǎng)化加劇，使得養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境遭到破壞，魚蝦病害頻發(fā)，最終造成巨大的經(jīng)濟損失。研究表明，水產(chǎn)動物致病的主要根源是養(yǎng)殖水體中亞硝態(tài)氮含量的嚴(yán)重超標(biāo)，亞硝酸鹽可以氧化魚蝦體內(nèi)的亞鐵血紅蛋白，使其成為高鐵血紅蛋白，導(dǎo)致其失去運輸氧的能力，最后造成魚蝦死亡。所以，控制水體中的亞硝態(tài)氮成為規(guī)模化養(yǎng)殖的關(guān)鍵之一。

與物理脫氮法相比，生物脫氮有其獨特的優(yōu)點：無二次污染,脫氮徹底,經(jīng)濟安全等。由于生物脫氮技術(shù)具有成本低、易操作、達(dá)標(biāo)排放可靠性強且無二次污染等優(yōu)點，逐漸成為食品工業(yè)廢水處理的主要方式。好氧反硝化作用是近年來提出的與傳統(tǒng)的缺氧反硝化脫氮相比具有獨特優(yōu)勢的生物脫氮技術(shù)：一方面，在有氧條件下進行反硝化，硝化作用和反硝化作用可同時在一個反應(yīng)器中進行，設(shè)備與操作成本大幅下降；另一方面，硝化作用的產(chǎn)物可直接作為反硝化作用的底物，避免抑制硝化作用，硝化和反硝化進程加劇。因此，好氧反硝化作用越來越受到人們的關(guān)注，國內(nèi)外對于好氧反硝化菌的篩選研究也比較多，但其成果仍舊遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足工業(yè)生產(chǎn)的實際需求。通過篩選分離好氧反硝化細(xì)菌，并對好氧反硝化菌的各種生長特性和反硝化特性進行深入研究，對養(yǎng)殖廢水、生活廢水及工業(yè)污水的脫氮處理有著重要的理論價值和實際意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)問題，提供了一株惡臭假單胞菌及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖及生活污水處理中的應(yīng)用，該菌株具有好氧反硝化的性能，能顯著降低水體中的硝態(tài)氮、亞硝態(tài)氮和氨態(tài)氮，從而彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明的惡臭假單胞菌NI3（Pseudomonas?putida?NI3）菌株，已于2013年9月29日保藏于中國武漢武漢大學(xué)的中國典型培養(yǎng)物保藏管理中心，保藏編號為CCTCC?NO:M2013457。

本發(fā)明的惡臭假單胞菌NI3（Pseudomonas?putida?NI3）菌株用于水體凈化。

本發(fā)明的惡臭假單胞菌NI3菌株以菌粉的形式制成微生物添加劑。

本發(fā)明的惡臭假單胞菌NI3菌株具有好氧反硝化的性能，其8h內(nèi)可完全降解濃度為5-10mg/L的亞硝態(tài)氮，能有效降低養(yǎng)殖廢水中硝態(tài)氮及亞硝態(tài)氮的含量；該菌株對生活污水中的氨態(tài)氮也具有明顯的降解作用，其7天的降解率能達(dá)到64.95%。因此，該菌株有望開發(fā)為水產(chǎn)微生態(tài)制劑及污水處理劑，效果顯著。

具體實施方式

下面對本發(fā)明的惡臭假單胞菌NI3（Pseudomonas?putida?NI3）菌株及其效果、應(yīng)用進行詳細(xì)描述。

實施例1菌株的分離篩選及鑒定

1、本發(fā)明所使用的培養(yǎng)基的組分如下：

初篩BTB培養(yǎng)基：牛肉膏3.0g；蛋白胨10.0g；蔗糖15.0g；氯化鈉20.0g；Teepol1.0g；溴麝香草酚藍(lán)0.00006g；水1000ml。

營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：蛋白胨10g；牛肉粉3g；氯化鈉5.0g；葡萄糖1g；水1000ml。

篩選培養(yǎng)基：NaNO₂0.1g（約20mg/L?NO₂-N）；葡萄糖5.0g；K₂HPO₄1.0g；NaCl2.0g；MgSO₄.7H₂O0.5g；水1000ml。

2、篩選方法

采用梯度稀釋法將污泥樣品稀釋后，取0.1mL均勻涂布于BTB培養(yǎng)基表面，置入恒溫培養(yǎng)箱，30℃下培養(yǎng)2～3d后，用接種環(huán)挑取使周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)藍(lán)色暈圈的單菌落，進行分離純化即為初篩菌株。共挑取了13株單菌落，分別命名為NK1、Y1-13、BX、BY、N1、N4、NI1、NI2、NI3、WU1、WU2、WU3、XAO1。接種初篩菌株至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，在30℃、205r/min條件下進行液體培養(yǎng)24h后，經(jīng)過離心重懸，以1%的接種量接種到篩選培養(yǎng)基中，30℃、205r/min條件下進行搖瓶處理，24h后取樣測定實驗體系中亞硝態(tài)氮濃度。其中，亞硝態(tài)氮NO₂^–N含量通過重氮-偶氮分光光度法測定，菌體量通過涂布法測定，測定結(jié)果如表1所示。

表1：各菌株培養(yǎng)24h后發(fā)酵液中NO₂^—N含量