[發(fā)明專利]豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1及其重組載體和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310479169.5
• 申請日: 2013-10-14
• 公開（公告）號: CN103555728A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉宇;魏泓;商海濤;郭科男;鄭小波;吳群
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/47;C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 謝殿武

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，特別涉及一種豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1，還涉及含有豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1的重組載體和應(yīng)用。

背景技術(shù)

養(yǎng)豬業(yè)是我國畜牧業(yè)的主體產(chǎn)業(yè)，而豬肉則是我國人群主要的動物性食品。與去勢公豬相比，全公豬即未去勢公豬綜合生產(chǎn)效益將提高30%，具有顯著的社會與經(jīng)濟價值，但公豬膻味的存在使其難以被消費者接受，消除或降低公豬膻味是推廣全公豬飼養(yǎng)必須解決的問題。研究表明，公豬膻味主要來源于沉積于豬肉脂肪組織中的兩種物質(zhì)：糞臭素和雄烯酮(5α-甾-16-稀-3α-酮)，其中雄烯酮是睪丸組織間質(zhì)細胞合成的甾體化合物，具有尿臊味，雄烯酮通過精索靜脈釋放到血液中而后進人唾液腺和脂肪組織，并在肝臟中代謝，經(jīng)尿液排泄；糞臭素是日糧和內(nèi)源蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生的色氨酸在大腸厭氧微生物作用下降解而產(chǎn)生的芳香族物質(zhì)，具有糞臭味；糞臭素經(jīng)腸壁吸收入血，主要經(jīng)肝臟代謝由尿排出，另一部分則貯存于脂肪組織。因此，降低雄烯酮和糞臭素的濃度可以達到消除膻味的目的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供一種豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1；本發(fā)明的目的之二在于提供含有豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1的重組載體；本發(fā)明的目的之三在于提供豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在降低豬肉膻味中的應(yīng)用；本發(fā)明的目的之四在于提供豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在抑制CYP11A1基因表達中的應(yīng)用；本發(fā)明的目的之五在于提供豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在抑制CYP17A1基因表達中的應(yīng)用；本發(fā)明的目的之六在于提供豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在抑制StAR基因表達中的應(yīng)用；本發(fā)明的目的之七在于提供豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在降低雄烯酮含量中的應(yīng)用。

1.豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1，其特征在于，所述豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示。

2.含有權(quán)利要求1所述豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1的重組載體。

優(yōu)選的，所述重組載體含有細胞篩選基因neo。

3.所述豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在降低豬肉膻味中的應(yīng)用。

4.所述豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在抑制CYP11A1基因表達中的應(yīng)用。

5.所述豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在抑制CYP17A1基因表達中的應(yīng)用。

6.所述豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在抑制StAR基因表達中的應(yīng)用。

7.所述豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1在抑制雄烯酮含量中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明公開了豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1，通過過量表達豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1，調(diào)控CYP17和STAR基因表達，從而直接或間接負調(diào)控豬體內(nèi)雄烯酮合成；同時還能調(diào)節(jié)糞臭素主要代謝酶CYP450，調(diào)控糞臭素的降解；同時由于COUP-TF的表達對雄烯酮的代謝起到負調(diào)控作用，進一步減弱了雄烯酮對糞臭素代謝的抑制作用，而協(xié)同降低糞臭素在豬體中的濃度；利用本發(fā)明公開的豬轉(zhuǎn)錄因子coup-tf1能夠降低豬肉膻味，能用于選育或者調(diào)節(jié)COUP-TFⅠ獲得低膻味的豬遺傳品系，具有很好的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為巴馬香豬組織總RNA（1、2為巴馬睪丸RNA；3、4為肝臟RNA）。

圖2為主要膻味基因在不同豬種肝臟中的表達情況。

圖3為主要膻味基因在不同豬種睪丸中的表達情況。

圖4為100ng/mL糞臭素的色譜圖。

圖5為糞臭素標準曲線。

圖6為4月齡巴馬豬肌肉和血漿糞臭素色譜圖（A:4月齡巴馬豬肌肉糞臭素色譜圖；B:4月齡巴馬豬血漿糞臭素色譜圖）。

圖7為雄烯酮測定的標準曲線。

圖8為1月齡和6月齡不過篩培養(yǎng)法所培養(yǎng)的細胞經(jīng)3β-HSD染色后的狀態(tài)（放大倍數(shù)：400×，A：6月齡不過篩培養(yǎng)法；B：1月齡不過篩培養(yǎng)法）

圖9為豬肝臟總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖。

圖10為COUP-TF?Ⅰ?PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖。

圖11為pEGFP-C1酶切電泳圖（M2:λ-Hind?III?digest?1：Vector?DNA）。

圖12為以COUP-TFⅠ-pMD19-T為模板進行的PCR擴增結(jié)果圖（M1:DL2000?DNA?Marker?1：PCR擴增產(chǎn)物）。