[發(fā)明專利]甜菊苷及萊鮑迪苷A的提純制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310478929.0
• 申請日: 2013-10-14
• 公開（公告）號: CN103483402A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李曉波;王夢月;郭翠容
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C07H15/256
• 分類號: C07H15/256;C07H1/08
• 代理公司: 上海交達專利事務(wù)所 31201
• 代理人: 王毓理;王錫麟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是一種生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的方法，具體是一種同時制備高純度甜菊苷及萊鮑迪苷A的方法。

背景技術(shù)

甜菊苷及萊鮑迪苷A為二萜苷類化合物，是菊科植物甜葉菊Stevia?rebaudiana干燥葉中的主要活性成分。其結(jié)構(gòu)式如下：

甜葉菊原產(chǎn)于南美洲，1977年我國引進栽培獲得成功。甜葉菊具有低熱量、高甜度、無副作用等優(yōu)點，是一種低熱值的天然糖料植物，可代替蔗糖和合成甜味劑，其甜度相當(dāng)于蔗糖的250-300倍，但其所含熱量僅為蔗糖的1/300。甜葉菊具有較好的抗菌、抗氧化活性；可有效預(yù)防和治療糖尿病；軟化血管和降低血脂，對肥胖癥、動脈硬化、冠心病有較好的防治效果。高純度的甜菊苷及萊鮑迪苷A可作為化學(xué)對照品用于甜葉菊藥材、含甜葉菊制劑的定性鑒別及定量分析，因此，如何從甜葉菊中同時制備高純度的甜葉菊及萊鮑迪苷A具有重要意義。

名為“甜菊糖苷中萊鮑迪A苷的研究”的學(xué)位論文中（劉杰，江南大學(xué)）公開了一種利用高效液相制備色譜制備相對純度為99%的萊鮑迪苷A的方法，即在制備條件（采用Lichrospher?NH₂10×250mm制備柱，以乙腈-水（35:65，v/v）為流動相，4mL/min流速，進樣量200μL）得到萊鮑迪苷A。這種方法只制備得到了萊鮑迪苷A，未能同時制備甜菊苷；同時，利用制備高效液相色譜的方法不能得到廣泛的運用。

經(jīng)過對現(xiàn)有技術(shù)的檢索發(fā)現(xiàn)，中國專利文獻號CN101220062，公開日2008-07-16，公開了一種高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A的制備方法。該方法以甜葉菊(StiviarebaudianaBertoni)的干燥葉或植株中的任一部位，或新鮮采集的同屬其它植物的葉或其它部位為原料，采用溶劑提取法、大孔樹脂吸附法、聚酰胺層析法、硅膠柱層析法、反相柱層析法或Sephadex?LH-20柱層析法、Toypear1柱層析法的一種或者多種方式分離，采用結(jié)晶、重結(jié)晶、柱層析等方法進行純化，并結(jié)合干燥等方法制備高純度甜菊苷和萊鮑迪苷A，純度均在85％以上。但該技術(shù)制備得到的甜菊苷及萊鮑迪苷A純度較低，不能滿足生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域應(yīng)用中對純度的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提出一種甜菊苷及萊鮑迪苷A的提純制備方法，制備得到的甜菊苷及萊鮑迪苷A純度均達到98%以上，可作為化學(xué)對照品用于甜葉菊藥材、含甜葉菊制劑的定性鑒別及定量分析；還可作為單體成分，對其活性進行研究。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：本發(fā)明通過將甜葉菊醇提液采用大孔樹脂吸附并經(jīng)過洗脫得到甜葉菊提取物浸膏，再將提取物浸膏進行硅膠柱層析并洗脫后收集其中流份，最后將收集的流份進行重結(jié)晶，得到純度98%以上的甜菊苷及萊鮑迪苷A精制品，其具體步驟如下：

1）先將甜葉菊藥材粉碎，加入乙醇溶液回流提取，過濾，取濾液依次用氯仿、正丁醇萃取，得正丁醇層浸膏；

2）將正丁醇層浸膏過大孔樹脂吸附并輔以乙醇進行除雜洗脫，回收溶劑，收集其中流份，得浸膏；

3）將浸膏進行柱層析并輔以氯仿-甲醇溶液洗脫，回收溶劑并收集其中流份，得到甜菊苷及萊鮑迪苷A粗品；

4）將甜菊苷及萊鮑迪苷A?粗品利用甲醇進行重結(jié)晶，得到純度大于98%的甜菊苷及萊鮑迪苷A精制品。

所述的甜葉菊為菊科植物甜葉菊干燥葉；

所述的回流提取過程中采用濃度為50%-70%（v/v）的乙醇溶液作為提取溶劑，其用量為8-12倍（W/V），提取1-2次。

所述的大孔樹脂吸附采用HZ-801的大孔樹脂；

所述的除雜洗脫是指：以濃度為40%(V/V)的乙醇溶液進行除雜，以濃度為50%-70%（V/V）的乙醇溶液進行洗脫。

所述的氯仿-甲醇溶液中氯仿與甲醇的體積比為9:1～6:4；

所述的收集其中流份是指：采用TLC檢測，以氯仿：甲醇：水5:4:1的體積比配制展開劑，以50%（v/v）硫酸-乙醇配置顯色劑，通過加熱顯色進行檢測，分別合并含甜菊苷及萊鮑迪苷A的流份。

技術(shù)效果