[發(fā)明專利]可分泌抗甲型肝炎病毒蛋白單抗的雜交瘤細(xì)胞及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310478507.3
• 申請日: 2013-10-14
• 公開（公告）號: CN103865881A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟媛;李瑞凈;李泓彥;劉莉莉
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;C07K14/10;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 何平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及甲型肝炎免疫檢測領(lǐng)域及蛋白純化領(lǐng)域，尤其是涉及一種可分泌抗甲型肝炎病毒蛋白單抗的雜交瘤細(xì)胞及應(yīng)用。

背景技術(shù)

甲型病毒性肝炎簡稱甲型肝炎，是由甲型肝炎病毒（甲肝病毒，Hepatitis?A?Virus，HAV）引起的一種腸道性疾病。甲型肝炎病毒（HAV）是正單鏈RNA病毒，屬微小RNA病毒科。人類感染甲肝病毒后，大多表現(xiàn)為亞臨床或隱性感染，僅少數(shù)人表現(xiàn)為急性甲型肝炎。甲肝病毒主要通過糞-口途徑傳播，潛伏期為15～45天，病毒常在患者轉(zhuǎn)氨酸升高前的5～6天就存在于患者的血液和糞便中。發(fā)病2～3周后，隨著血清中特異性抗體的產(chǎn)生，血液和糞便的傳染性也逐漸消失，長期攜帶病毒者極罕見。其致病機(jī)制是肝炎病毒在肝臟復(fù)制，造成肝細(xì)胞損害而引起的一系列癥狀：如發(fā)熱、厭油、厭食、腹痛、腹瀉、黃疸等。甲型肝炎不僅危害人們的身心健康，對社會和家庭也會帶來一定的經(jīng)濟(jì)損失。

單克隆抗體（單抗）可用于分析抗原的細(xì)微結(jié)構(gòu)及檢驗(yàn)抗原抗體未知的結(jié)構(gòu)關(guān)系。生產(chǎn)出針對復(fù)雜生物混合物中的特定分子的抗體，可用于分離、分析及純化該特定分子抗原。由單克隆抗體制備的試劑可用于臨床診斷和治療。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，有必要提供一種可分泌抗甲型肝炎病毒蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞及其應(yīng)用。

此外，還有必要提供上述雜交瘤細(xì)胞或其分泌的單克隆抗體在醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域的應(yīng)用。

一種可分泌抗甲型肝炎病毒蛋白單抗的雜交瘤細(xì)胞，保藏號為CCTCC?No：C2013131。

上述雜交瘤細(xì)胞可應(yīng)用在制備診斷甲型肝炎檢測試劑或檢測設(shè)備領(lǐng)域中。

上述雜交瘤細(xì)胞可用于純化重組甲型肝炎抗原。

一種由上述可分泌抗甲型肝炎病毒蛋白單抗的雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體。

上述單克隆抗體在制備診斷甲型肝炎檢測試劑或檢測設(shè)備領(lǐng)域的應(yīng)用。

上述單克隆抗體在純化重組甲型肝炎抗原中的應(yīng)用。

一種甲型肝炎病毒檢測試紙，其特征在于，包括上述單克隆抗體。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述檢測試紙包括支撐薄片、樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜、吸收墊、檢測線及質(zhì)控線，所述樣品墊、所述金標(biāo)墊、所述硝酸纖維素膜及所述吸收墊從所述支撐薄片的一端向另一端依次設(shè)置在所述支撐薄片上，所述樣品墊與所述金標(biāo)墊部分重疊，所述金標(biāo)墊與所述硝酸纖維素膜部分重疊，所述硝酸纖維素膜與所述吸收墊部分重疊，所述檢測線及所述質(zhì)控線設(shè)在所述硝酸纖維素膜上，且所述檢測線設(shè)在靠近所述金標(biāo)墊的一端，所述質(zhì)控線設(shè)在靠近所述吸收墊的一端，所述金標(biāo)墊上涂覆有所述單克隆單體包附膠體金顆粒形成膠體金標(biāo)記的單克隆抗體，所述檢測線為親和純化的抗甲型肝炎病毒蛋白兔多抗，所述質(zhì)控線為羊抗鼠IgG抗體。

一種檢測試劑盒，包括上述任一實(shí)施例所述的甲型肝炎病毒檢測試紙。

上述雜交瘤細(xì)胞，命名為HAV-3A2，于2013年8月28日保藏在湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)保藏中心（即中國典型培養(yǎng)物保藏中心），保藏號是CCTCC?No：C2013131。

上述雜交瘤細(xì)胞的分泌產(chǎn)量高，其分泌得到的抗甲型肝炎病毒蛋白單克隆抗體具有高親和力、高特異性等優(yōu)點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用在甲型肝炎的檢測領(lǐng)域，如檢測試劑或檢測設(shè)備的制備領(lǐng)域等，在特異性、靈敏度和檢測率等方面較之傳統(tǒng)的檢測方法具有顯著的優(yōu)勢。

該雜交瘤細(xì)胞及其分泌的單克隆抗體可應(yīng)用在重組甲型肝炎抗原的篩選純化過程中，純化得到的重組甲型肝炎抗原具有親和力好、特異性強(qiáng)、純度高、活性接近天然抗原的活性蛋白等優(yōu)點(diǎn)，對于甲型肝炎的診斷和防止工作有著重要的意義。

附圖說明

圖1為一實(shí)施方式的檢測試紙的正面示意圖。

圖2為圖1中檢測試紙的縱截面示意圖。

圖3為檢測試劑盒示意圖。

圖4為實(shí)施例5中將免疫親和純化出的重組抗原經(jīng)CsCl梯度分離后，將收集的各管懸液經(jīng)放射免疫測定的浮密度測定結(jié)果圖。

具體實(shí)施方式

以下組要結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對可分泌抗甲型肝炎病毒蛋白單抗的雜交瘤細(xì)胞及其應(yīng)用作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。

本實(shí)施方式的可分泌抗甲型肝炎病毒蛋白單抗的雜交瘤細(xì)胞保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），保藏號為CCTCC?No：C2013131。該雜交瘤細(xì)胞可分泌出抗甲型肝炎病毒蛋白的單克隆抗體。該雜交瘤細(xì)胞及其分泌的單克隆抗體可用于制備甲型肝炎病毒蛋白的檢測試劑或設(shè)備領(lǐng)域中。

一實(shí)施方式的甲型肝炎病毒蛋白的檢測試劑盒包括殼體、檢測試紙和其他檢測試劑。