[發(fā)明專利]一種親和沉淀介質(zhì)的合成方法及其制備依諾肝素鈉的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310477846.X
• 申請(qǐng)日: 2013-10-14
• 公開（公告）號(hào): CN103554305A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊華英;萬偲;張素芳;楊麗琴;高鐵旦;魏超娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌市浩然生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): C08B37/10
• 分類號(hào): C08B37/10
• 代理公司: 南昌洪達(dá)專利事務(wù)所 36111
• 代理人: 劉凌峰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及依諾肝素鈉的制備方法，更具體的說，本發(fā)明涉及一種親和沉淀介質(zhì)的制備及其在依諾肝素鈉制備中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肝素（Heparin）是一種廣泛存在于人和哺乳動(dòng)物組織中的具有天然抗凝血活性酸性黏多糖。肝素作為抗凝血藥物已經(jīng)在臨床上使用了近百年，到目前為止仍是最重要的抗凝血和抗血栓藥物之一，是防治深層靜脈血栓形成等栓塞性疾病的首選藥物。此外，肝素還具有抗病毒、抗炎、抗過敏、抗癌、降血脂等多種生物學(xué)功能。肝素在長期使用的過程中，產(chǎn)生了不可預(yù)見的副作用，易導(dǎo)致出血、血小板減少、骨質(zhì)疏松等副作用。為了減少肝素的副作用，二十世紀(jì)八十年代末研發(fā)了低分子肝素。

依諾肝素鈉（Enoxaparin?sodium）是低分子肝素的一種，歐洲藥典（EP）7.0版對(duì)依諾肝素鈉定義為：它是通過對(duì)豬腸黏膜肝素的芐基酯衍生物進(jìn)行堿解聚而獲得的。EP7.0規(guī)定依諾肝素鈉的重均分子量為3800-5000道爾頓，特征值約為4500，分子量大于8000的組分不超過18%、分子量2000～8000的組分為68%～82%、分子量小于2000的組分為12%～20%。按干燥品計(jì)算，抗Ⅹa因子效價(jià)為95-120IU/mg，抗Ⅱa因子效價(jià)為20～35IU/mg。抗Ⅹa因子效價(jià)與抗Ⅱa因子效價(jià)的比值為3.3～5.3。

依諾肝素鈉主要用于抗血栓、抗凝血、預(yù)防深靜脈血栓及肺栓塞、治療不穩(wěn)定心絞痛和非Q波心梗等。其主要的作用機(jī)制是通過與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合，經(jīng)依諾肝素鈉結(jié)合的抗凝血酶Ⅲ結(jié)合凝血酶和FⅩa的能力增強(qiáng)，因依諾肝素鈉分子鏈較短，對(duì)凝血酶的抑制作用較弱，而對(duì)抗FⅩa的作用較強(qiáng)，能抑制凝血酶的激活，還能抑制血小板聚集，減少暫時(shí)性血小板凝塊轉(zhuǎn)變成永久性血小板血纖維蛋白凝塊的發(fā)生機(jī)率，改變血液的流動(dòng)性，降低血液黏度，維持血液正常的流動(dòng)。與其他低分子量肝素相比，依諾肝素鈉具有皮下注射吸收好、半衰期長、生物利用度高、副反應(yīng)少，劑量易于確定，不需要實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)等諸多優(yōu)點(diǎn)，頗受臨床醫(yī)生和廣大患者的青睞，臨床應(yīng)用的適應(yīng)癥不斷擴(kuò)大。目前其全球市場占有率達(dá)低分子肝素的60%以上。

目前世界上生產(chǎn)依諾肝素鈉的工藝為肝素芐基酯的堿裂解法。美國專利US005389618A公布了依諾肝素鈉的基本制備過程：肝素季銨鹽的制備，肝素芐基酯的制備，對(duì)肝素芐基酯進(jìn)行堿解聚等工藝步驟。CN102050888B公開了一種依諾肝素鈉的制備方法，其采用親水液相反應(yīng)和疏水液相反應(yīng)以及固相反應(yīng)，將大分子肝素鈉降解為具有特定結(jié)構(gòu)的低分子肝素鈉。CN100436483C公開了一種依諾肝素鈉的純化方法，其在水媒介中用長鏈季銨鹽鹽化肝素，經(jīng)氯芐酯化后在堿性條件下解聚得到依諾肝素粗品，經(jīng)活性炭和大孔吸附樹脂脫色后得到依諾肝素成品。

然而，其一，上述專利公開的制備工藝中有機(jī)溶劑使用量大，對(duì)環(huán)境有嚴(yán)重的危害；其二，上述專利中幾乎沒有提及對(duì)原料中肝素鈉的結(jié)構(gòu)類似物硫酸皮膚素和多硫酸軟骨素等雜質(zhì)的去除方法，肝素中雜質(zhì)的存在會(huì)對(duì)后續(xù)的肝素的解聚順序等制備過程及依諾肝素鈉精品的分子量分布產(chǎn)生直接的影響。

?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了改進(jìn)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品質(zhì)量，工藝穩(wěn)定可控的依諾肝素鈉制備方法。

本發(fā)明的目的是這樣來實(shí)現(xiàn)的，其方法步驟為：

（1)親和沉淀介質(zhì)的合成

本親和沉淀介質(zhì)以甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯組成的pH敏感型聚合物為基質(zhì)[其中基質(zhì)優(yōu)選Eudragit?S-100（簡稱ES-100）或聚丙烯酸樹脂Ⅲ號(hào)]，以凝血酶、抗凝血酶Ⅲ或魚精蛋白為配基；

具體操作步驟為：稱取一定量的基質(zhì)，加入適量N,N-二甲基甲酰胺攪拌使其溶解,將ES-100溶液加入反應(yīng)器中，底部通氮?dú)鈹嚢?然后加入N,N-二異丙基碳二亞胺、1-羥基苯并三唑使ES-100活化3～5分鐘；活化完成后加入配基偶聯(lián)反應(yīng)2.5～3.0小時(shí)；偶聯(lián)反應(yīng)完成后，用8mol/L醋酸調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH值至3.5～4.5，反應(yīng)產(chǎn)物完全析出后抽掉反應(yīng)液，沉淀用0.1mol/L，pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液洗滌3次，抽去緩沖液即得親和沉淀介質(zhì)。

（2)親和沉淀介質(zhì)純化肝素鈉粗品