[發明專利]鑒定高丹草種子真偽的試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310477580.9
• 申請日: 2013-10-13
• 公開（公告）號: CN103525928A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 劉志鵬;劉鵬;馬利超;王彥榮;邰建輝
• 申請（專利權）人: 蘭州大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張真

1.一種鑒定高丹草種子真偽的引物，其特征是包括有：

第一對高丹草引物：GL-R3-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，

???????????????????GL-R3-R（5′-3′）：TAACTGCTACACAATGGCCCTTT；

第二對高梁引物：GLC-R1-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，

??????????????????GLC-R1-R（5′-3′）：TGAACTTCAAGATGCCGACTCC。

2.一種鑒定高丹草種子真偽的試劑盒，其特征是包括有：

第一組：高丹草PCR檢測體系，其中包括TaKaRa?Taq，10×PCR?Buffer（Mg²⁺Plus），dNTP?Mixture，引物GL-R3-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，引物GL-R3-R（5′-3′）：TAACTGCTACACAATGGCCCTTT，ddH₂O；

第二組：高梁PCR檢測體系，其中包括TaKaRa?Taq，10×PCR?Buffer（Mg²⁺Plus），dNTP?Mixture，引物GLC-R1-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，引物GLC-R1-R（5′-3′）：TGAACTTCAAGATGCCGACTCC1μl，ddH₂O。

3.一種鑒定高丹草種子真偽的方法，其特征是包括如下步驟：

A.收集種子，采用雙層濾紙萌發法，25℃萌發72小時，提取萌發種子基因組DNA備用；

B.利用第一對高丹草專用引物，對種子基因組DNA進行PCR檢測；PCR檢測體系總體積為50μl，其中包括TaKaRa?Taq0.25μl，10×PCRBuffer，Mg²⁺Plus，5μl，dNTP?Mixture4μl，DNA模板，濃度為5000ng/μl，1μl，引物GL-R3-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，濃度為10nM，1μl，引物GL-R3-R（5′-3′）：TAACTGCTACACAATGGCCCTTT，濃度為10nM，1μl，ddH₂O37.75μl；擴增條件為：（1）95℃預變性3分鐘；（2）95℃變性35秒；（3）56℃退火35秒；（4）72℃延伸35秒；（5）2～4步驟循環35次；（6）72℃延伸7分鐘；

C.利用第二對高梁專用引物，對種子基因組DNA進行PCR檢測；PCR檢測體系的總體積為50μl，其中包括TaKaRa?Taq0.25μl，10×PCRBuffer，Mg²⁺Plus，5μl，dNTP?Mixture4μl，DNA模板，濃度為5000ng/μl，1μl，引物GLC-R1-F（5′-3′）：CCCAATATTTATCATGAGACTTGCA，濃度為10nM，1μl，引物GLC-R1-R（5′-3′）：TGAACTTCAAGATGCCGACTCC，濃度為10nM，1μl，ddH₂O37.75μl；擴增條件為：（1）95℃預變性3分鐘；（2）95℃變性35秒；（3）55.5℃退火35秒；（4）72℃延伸35秒；（5）2～4步驟循環35次；（6）72℃延伸7分鐘。