[發明專利]一組用于鑒定硬腳和軟腳鐵皮石斛的微衛星分子標記

無效

• 申請號: 201310476400.5
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103571949A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 王慧中;盧江杰
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 杜軍

技術領域

本發明屬于植物基因組DNA分子標記技術領域，具體涉及一組可用于鑒定硬腳和軟腳鐵皮石斛的微衛星分子標記。

背景技術

鐵皮石斛作為藥用石斛最主要的代表種，是我國最珍貴的傳統名貴中藥材之一，被尊列為“中華九大仙草”之首，素有“藥中黃金”之美稱。早在東漢末年的《神農本草經》中就有記載，《本草綱目》和《中藥大詞典》等我國古代多部醫學著作中都記載了鐵皮石斛具有增強免疫力、消除腫瘤、抑制癌癥等作用，對咽喉疾病、腸胃疾病、白內障、心血管疾病、糖尿病、腫瘤均具有顯著療效，特別是對人體肺癌細胞具有高達74.7～97.2﹪的抑制率。

鐵皮石斛通常分為軟腳和硬腳兩大類：軟腳鐵皮石斛莖大多粗短且柔軟，石斛多糖和石斛堿含量高，味甘，咀嚼后幾乎沒有殘渣。經過邊炒邊扭的工藝加工炮制成螺旋形的石斛干品就是上等的“鐵皮楓斗”。一般來說，至少10公斤生鮮的軟腳鐵皮石斛才能加工成1公斤鐵皮楓斗。而正宗的野生鐵皮石斛通常在每公斤1000元左右，這導致鐵皮楓斗的價格堪比黃金。硬腳鐵皮石斛莖較長且質硬，黏性小（石斛多糖含量低），不能被烘軟，只能煮水服用。

另一方面，野生鐵皮石斛生境獨特，繁殖困難，加上過度采收，歷史文獻報道的浙江、云南、貴州、廣西、湖南、安徽、江西等鐵皮石斛主要分布區，目前的實地調查中已經很難找到大面積的野生鐵皮石斛分布。2011年鐵皮石斛成為第二批“國家重點一級保護的珍稀瀕危植物”，根本不可能用于生產，所以近10年來，鐵皮石斛人工栽培、規模化種植技術的研究成為熱點之一。目前，鐵皮石斛的人工栽培技術逐漸成熟，產業化規模不斷擴大。形成了集科研、種植、加工、銷售為一體的鐵皮石斛產業群。然而，生鮮的軟腳和硬腳鐵皮石斛因為形狀、色澤方面的差別，消費者容易分辨。不過，經過烘焙、卷曲等工序而成的鐵皮楓斗，其原料究竟是軟腳還是硬腳，單憑肉眼觀察，就算是行家已很難分辨，更不要說普通消費者了。而且硬腳鐵皮石斛由于纖維含量高，不易折斷，更容易做出楓斗，所以市場上往往被用來以次充好，冒充或摻入軟腳鐵皮楓斗中。加上現有的植物分類學或化學手段，很難鑒定到物種水平，所以多年來一直沒有對軟腳和硬腳鐵皮石斛的高效、科學、通用的鑒定方法。

分子標記鑒定是當今流行的比傳統鑒定方法更科學和靈敏的重要方法之一。其中的微衛星標記(SSR,Simple?Sequence?Repeat)作為以DNA聚合酶鏈式反應(PCR,Polymerase?Chain?Reaction)技術和測序技術為基礎的分子標記，被認為是當前種內遺傳變異研究中分辨率最高、揭示力最強的分子標記之一。迄今，國內外尚無通過鐵皮石斛微衛星分子標記開發來進行硬腳和軟腳鐵皮石斛品種鑒定的相關報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一組鐵皮石斛的微衛星分子標記，其能用于準確區分硬腳和軟腳鐵皮石斛，為市場打假和藥材鑒定所用。

為了解決上述技術問題，本發明提供一組共7個鐵皮石斛微衛星分子標記，他們的引物對序列分別為：

HZs01引物對：上游5’-CGAAGGTGGCGAAACAAGAC-3’；

下游5’-GAAAACTACAAATTACCAAAGAC-3’；

HZs02引物對：上游5’-AAGTGGATAACGGGGATAAG-3’；

下游5’-TTTTGGCAATGAACCTAATG-3’；

HZs03引物對：上游5’-GCAAAAGCTAGGGTAGAGTTC-3’；

下游5’-CTCCTTCCCAATGAGCTT-3’；

HZs04引物對：上游5’-GAGAGAAGGGGAGCAATG-3’；

下游5’-CTAAGTTCGCACTCATCTCTG-3’；

HZs05引物對：上游5’-GGAGGAAGTAGGGAGTCAAC-3’；

下游5’-TAAACCTTATAGAAGCCAAA-3’；

HZs06引物對：上游5’-TGGGCTAACCATTGATTTAC-3’；

下游5’-CAGACTTTATTGTTTGCCTAATT-3’；

HZs07引物對：上游5’-CAAATTCTCCGATCTCCGTT-3’；

下游5’-AAGTCCCCAAACCTTATCAA-3’。