[發明專利]一種北美冬青的組織培養方法

有效

• 申請號: 201310476057.4
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103563745A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 張俊林;錢飛;孫英坤
• 申請（專利權）人: 杭州市園林綠化股份有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州賽科專利代理事務所 33230
• 代理人: 曹紹文

1.一種北美冬青的組織培養方法，其特征在于包括以下步驟：

1）在晴天的上午，從北美冬青雌株苗中選取健康、觀賞性狀表現典型的植株作為外植體材料；

2）在超凈工作臺上，將清洗干凈的外植體截成2.2-2.6cm單芽莖段，依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并沖洗處理；

3）外植體滅菌后用無菌刀切去莖段上下兩端0.15-0.25cm的死亡組織，將處理后的莖段按植物形態學下端插入配置好的誘導分化培養基中進行誘導培養；

4）在莖段接入培養基15-25d后，腋芽萌發生長，并長出嫩莖，將嫩莖從腋芽基部切割，將長于0.5cm的嫩莖切割成至少含一個葉片的0.4-0.6cm的莖段，轉接入增殖培養基進行增殖培養；

5）莖段在增殖培養基中培養20-30d后，莖段增殖形成不定芽，并抽生嫩莖，將莖段分化生長出的長度為2-3cm的嫩莖切下，接入生根培養基進行根誘導培養。

2.如權利要求1所述的北美冬青的組織培養方法，其特征在于步驟1）中，采集的外植體為當年生半木質化的枝條，采集后剪除葉片，同時保留0.9-1.2cm的葉柄，自來水沖洗干凈后，洗潔精溶液浸泡5-10min，再用自來水沖洗1-2h備用。

3.如權利要求1所述的北美冬青的組織培養方法，其特征在于步驟2）中，外植體的消毒方法具體操作為：先用濃度為70-75%的酒精，浸泡30-50s，經無菌水沖洗3-5次后，再加入0.5-1‰升汞溶液，浸泡4-8min，并不斷晃動，最后用無菌水沖洗7-8次。

4.如權利要求1所述的北美冬青的組織培養方法，其特征在于步驟3）中，所述誘導分化培養基的配方為WPM+0.5-1.5mg.L^-16-BA+0.05-0.2mg.L^-1NAA+2-4%蔗糖+0.7%卡拉膠，用1mol/L的NaOH或HCl調節培養基PH值，至培養基PH值為5.4-5.8。

5.如權利要求1所述的北美冬青的組織培養方法，其特征在于步驟4）中，所述的增殖培養基配方為WPM+0.5-1.5mg.L^-16-BA+0.05-0.2mg.L^-1IBA+2-4%蔗糖+0.7%卡拉膠，用1mol/L的NaOH或HCl調節培養基PH值，至培養基PH值為5.4-5.8，其中培養室中培養溫度為25±2℃，光照時間為12-14h/d,光強為1500-2000LX。

6.如權利要求1所述的北美冬青的組織培養方法，其特征在于步驟5）中，所述的生根培養基的配方為1/2WPM+0-0.2mg.L^-1IBA+0.1-0.3mg.L^-1NAA+2-4%蔗糖+0.7%卡拉膠+0.2g.L^-1活性炭，用1mol/L的NaOH或HCl調節培養基PH值，至培養基PH值為5.4-5.8：培養30-40d后形成健壯的生根苗。