[發(fā)明專利]一種提高粗肝素鈉提取工藝酶解效率的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310474083.3
• 申請(qǐng)日: 2013-10-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103539869A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高秉學(xué);童永剛;湯彬彩;潘衛(wèi)春;楊志秋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江凱勝畜產(chǎn)品加工有限公司
• 主分類號(hào): C08B37/10
• 分類號(hào): C08B37/10
• 代理公司: 杭州九洲專利事務(wù)所有限公司 33101
• 代理人: 王洪新

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種制備粗品肝素鈉的工藝，具體涉及一種提高粗肝素鈉提取工藝酶解效率的方法。

背景技術(shù)

肝素鈉是一種臨床常用的抗凝血藥物，是主要從豬小腸粘膜中提取的粘多糖物質(zhì)，具有顯著地抗凝血和防止血栓形成的作用。鹽析提取法是國(guó)內(nèi)常用的豬小腸黏膜肝素提取方法，其主要工藝是在堿性環(huán)境下用鹽將小腸黏膜中的肝素從蛋白質(zhì)復(fù)合物中分離出來(lái)，然后用強(qiáng)堿性陰離子交換樹(shù)脂從提取液中將肝素陰離子吸附，再使用一定濃度的鹽水溶液將肝素陰離子洗脫下來(lái)，經(jīng)乙醇沉淀、干燥后即可得到肝素粗品；但是該處理方法導(dǎo)致雜質(zhì)眾多，特別是皮膚素，得率較低。另有一種提取法采用堿性蛋白酶進(jìn)行單一酶解，該方法不能夠處理酸性蛋白質(zhì)，導(dǎo)致雜質(zhì)增多，得率降低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服上述背景技術(shù)的不足，提供一種提高粗肝素鈉提取工藝酶解效率的方法，該方法應(yīng)能有效地提高酶解效率，分解雜質(zhì)蛋白，使粗品質(zhì)量提高，從而提高得率，增加經(jīng)濟(jì)效益。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種提高粗肝素鈉提取工藝酶解效率的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

（1）溶解：配制粘膜水，在豬小腸粘膜液中加入水，料液比按每根豬小腸加6～7kg水；

（2）酸性蛋白酶催化：將粘膜水加熱到28℃～50℃，按每根豬小腸加入2～3g酸性蛋白酶，調(diào)節(jié)pH到4～6，接著按每根豬小腸加入0.01～0.02g金屬離子，利用氯化鈉調(diào)節(jié)鹽度為3.5～4，保溫反應(yīng)0.5h～1h；

（3）堿性蛋白酶催化：繼續(xù)加熱到37℃～60℃，加入兩種堿性蛋白酶，每種堿性蛋白酶的加入量按每根豬小腸加入1～3g，然后調(diào)節(jié)pH到7.8～9，鹽度為4～4.5，保溫反應(yīng)1.5h～2h，再加熱到85℃～90℃，保溫反應(yīng)25～30min；

（4）用組合濾布過(guò)濾酶解母液，將過(guò)濾后的酶解母液導(dǎo)入吸附罐，進(jìn)行后續(xù)的工序。

所述酸性蛋白酶為天冬氨酸蛋白酶、胃蛋白酶、黑曲霉酸性蛋白酶中的任意一種。

所述金屬離子為鋅離子、鎂離子、鈣離子中的任意一種。

所述兩種堿性蛋白酶為胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、2709堿性蛋白酶中的任意兩種。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供的方法首次采用酸堿蛋白酶聯(lián)合處理方案，結(jié)合溫度，鹽度，pH調(diào)節(jié)，能夠很好的分解酸性的雜質(zhì)蛋白和堿性的雜質(zhì)蛋白，提高粗品肝素鈉得率；與傳統(tǒng)工藝相比，本發(fā)明設(shè)計(jì)多酶組合，多層次保溫體系，建立高得率粗品肝素鈉提取工藝，通過(guò)對(duì)酶解母液進(jìn)行中控效價(jià)測(cè)定，肝素鈉可達(dá)到為9U/ml，而傳統(tǒng)工藝大概為6～7U/ml，酶解效率明顯，提升顯著增加經(jīng)濟(jì)效益，有很高的實(shí)用價(jià)值。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于以下實(shí)施例。

實(shí)施例1：

一種提高粗肝素鈉提取工藝酶解效率的方法，包括以下步驟：

（1）溶解：將800根豬小腸制得的豬小腸粘膜液通過(guò)粘膜泵打入酶解罐，在酶解罐內(nèi)加入自來(lái)水，料液比按每根豬小腸加6kg自來(lái)水，得到粘膜水；在加料的過(guò)程中，開(kāi)啟攪拌棒，使物料均勻，攪拌轉(zhuǎn)速可選擇50r/min；

（2）酸性蛋白酶催化：打開(kāi)酶解罐的蒸汽閥門，將酶解罐內(nèi)的粘膜水升溫到28℃，加入1600g天冬氨酸蛋白酶（即2g/根），利用鹽酸調(diào)節(jié)pH為6，接著加入8g鋅離子（即0.01g/根），利用氯化鈉調(diào)節(jié)鹽度為3.5，保溫?cái)嚢璺磻?yīng)0.5h；該步驟可以使酸性蛋白水解，去除酸性蛋白，這是與傳統(tǒng)工藝最大的差別所在，可使粗品肝素質(zhì)量得到提高；

（3）堿性蛋白酶催化：打開(kāi)酶解罐的蒸汽閥門，將酶解罐內(nèi)的粘膜水升溫到37℃，加入2400g胰蛋白酶（即3g/根）、800g木瓜蛋白酶（即1g/根），然后利用燒堿調(diào)節(jié)pH為7.8，用氯化鈉調(diào)節(jié)鹽度為4，保溫?cái)嚢璺磻?yīng)1.5h；之后再加熱到85℃，保溫?cái)嚢璺磻?yīng)25min；該步驟可以使堿性蛋白水解，使肝素能夠很好的提出來(lái)，得率高；

（4）用組合濾布過(guò)濾酶解母液，組合濾布由兩層濾布疊加而成，目數(shù)分別是60目和100目，之后將酶解母液導(dǎo)入吸附罐，進(jìn)行后續(xù)的工序（包括吸附、洗滌、沉淀和干燥工序），最終得到高純度的肝素鈉產(chǎn)品。

實(shí)施例2：

一種提高粗肝素鈉提取工藝酶解效率的方法，包括以下步驟：

（1）溶解：將800根豬小腸制得的豬小腸粘膜液通過(guò)粘膜泵打入酶解罐，在酶解罐內(nèi)加入自來(lái)水，料液比按每根豬小腸加7kg自來(lái)水，得到粘膜水；在加料的過(guò)程中，開(kāi)啟攪拌棒，使物料均勻，攪拌轉(zhuǎn)速可選擇50r/min；