[發(fā)明專利]牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA檢測(cè)試劑盒

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310473997.8
• 申請(qǐng)日: 2013-10-11
• 公開（公告）號(hào): CN103529181A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王昱;聶福平;楊俊;李應(yīng)國(guó);肖進(jìn)文;袁曾壯;葉自霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號(hào): G01N33/04
• 分類號(hào): G01N33/04
• 代理公司: 重慶市恒信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及牛奶制品中的青霉素酶的檢測(cè)，具體涉及一種牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

牛乳中抗生素的殘留問題越來越多的引起國(guó)際社會(huì)的關(guān)注，隨著國(guó)家對(duì)乳及乳制品抗生素殘留監(jiān)管力度的增加，一些不法商販在牛奶中非法添加青霉素酶，使牛乳在檢測(cè)中達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)。青霉素酶的過度使用會(huì)使人體產(chǎn)生過敏反應(yīng)，更可能引起抗生素的濫用?，F(xiàn)有的青霉素酶的檢測(cè)方法有碘量法、酸度法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法、頭孢硝噻吩顯色法以及杯碟法等。但是這些方法都有著諸如操作繁瑣，檢測(cè)靈敏度不高等缺點(diǎn)。特別是作為確證方法的杯碟法，操作過程需要進(jìn)行微生物培養(yǎng)，然后將系列濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品加入牛津杯，檢測(cè)時(shí)間不少于3～5天，通量性極低。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明通過AlphaLISA檢測(cè)方法來檢測(cè)牛奶制品中青霉素酶，提供了一種用于檢測(cè)牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA檢測(cè)試劑盒。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA檢測(cè)試劑盒，包括青霉素酶標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化青霉素酶、抗鼠IgG包被受體磁珠、鏈親和素供體磁珠、抗青霉素酶單克隆抗體和檢測(cè)緩沖液；其中所述抗鼠IgG包被受體磁珠包括100ug/mL受體磁珠（終濃度）、0.05%的Proclin-300和pH7.4的PBS溶液，鏈親和素供體磁珠包括100ug/mL供體磁珠（終濃度）、25mM的HEPES、100mM的NaCl溶液和0.05%的Proclin-300。

上述試劑盒中所述抗鼠IgG包被受體磁珠為1?mg/mL，鏈親和素供體磁珠為1?mg/mL，抗青霉素酶單克隆抗體為1?mg/mL，生物素化青霉素酶0.5mg/mL。

使用時(shí)，以總體積25uL計(jì)：其中抗鼠IgG包被受體磁珠5uL、鏈親和素供體磁珠5uL、抗青霉素酶單克隆抗體5uL、生物素化青霉素酶5uL、待測(cè)樣品5uL。

本發(fā)明的試劑盒封裝時(shí)，包括青霉素酶標(biāo)準(zhǔn)品（5000?UI/mL，100?uL/盒）、生物素化青霉素酶（0.5?mg/mL，100?uL/盒）、抗青霉素酶單克隆抗體（1?mg/mL，20?uL/盒）、抗鼠IgG包被受體磁珠（1?mg/mL，50?uL/盒）、鏈親和素供體磁珠（1?mg/mL，50?uL/盒）、檢測(cè)緩沖液（100?mL/盒）、白色反應(yīng)板（96T，1塊/盒）、封口膜（1塊/盒）、操作說明書（1份/盒）。

借由上述技術(shù)方案，本發(fā)明至少有一下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：利用本發(fā)明檢測(cè)牛奶中的青霉素酶，樣品用量少僅使用5uL即可、靈敏度高、不需洗滌、檢測(cè)周期短等優(yōu)點(diǎn)。

附圖說明

圖1為青霉素酶標(biāo)準(zhǔn)曲線示意圖；

圖2為AlphaLISA檢測(cè)反應(yīng)過程示意圖;

圖中：1-鏈親和素供體磁珠，2-生物素化青霉素酶，3-抗青霉素酶單克隆抗體，4-青霉素酶，5-抗鼠IgG包被受體磁珠。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。

試劑盒中的抗青霉素酶單克隆抗體可選用市購(gòu)的，也可用常規(guī)制備單克隆抗體的方法制備。鏈親和素供體磁珠包括100ug/mL供體磁珠、25mM的HEPES、100mM的NaCl溶液和0.05%的Proclin-300。檢測(cè)緩沖液選用常規(guī)檢測(cè)試劑盒中的緩沖液。

一、抗鼠IgG包被受體磁珠的制備

1.洗滌受體磁珠：取5～50μL（20mg/mL）的受體磁珠于1.5mL的離心管中，加入50μL的PBS（pH=7.4），14000r/min離心15min，去上清。

2.偶聯(lián)：（400mM的NaBH3CN，現(xiàn)配：25mg?NaBH3CN+1mL水）配制如下體系（20μL）：5μL受體磁珠（20mg/mL）+10μL抗鼠IgG抗體（1mg/mL）+1μL?NaBH3CN+0.125μL的10%TW20+3.875μL的HEPES?Buffer。

????在37℃條件下，6～10r/min振蕩反應(yīng)18～24h。

3.封閉：（用800mM的NaOH配制65mg/mL的CMO，現(xiàn)配：5mL≈325mg）向管中加入10μL的CMO?Buffer，在37℃條件下，6～10r/min振蕩反應(yīng)1h。