[發明專利]一種檢測TREM2基因R47H突變的探針、試劑盒和方法

有效

• 申請號: 201310473863.6
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103555829A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 張含;鐘力;康冉冉;張云武;卜國軍;許華曦
• 申請（專利權）人: 廈門人瑞生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12M1/34
• 代理公司: 廈門市誠得知識產權代理事務所(普通合伙) 35209
• 代理人: 程文敢

1.一種用于檢測TREM2基因R47H突變的探針，其為下述（A）的寡核苷酸的探針和下述（B）的寡核苷酸的探針的至少一種，

（A）SEQ?ID?NO:3的堿基序列，5’和3’兩端分別偶聯上熒光基團和淬滅基團；

（B）SEQ?ID?NO:4的堿基序列，5’和3’兩端分別偶聯上與(A)不同的熒光基團和相應的淬滅基團。

2.權利要求1的探針，其特征在于，所述（A）和（B）的寡核苷酸的探針為用于檢測SEQ?ID?NO:5的堿基序列中第140位堿基G??→A?的突變的探針。

3.權利要求1的探針，其特征在于，所述（A）的5’和3’兩端分別偶聯上FAM熒光基團和BHQ1淬滅基團；所述（B）的5’和3’兩端分別偶聯上HEX熒光基團和BHQ1淬滅基團。

4.一種試劑盒，其特征在于，包含權利要求1-3任一所述的探針。

5.一種用于檢測TREM2基因R47H突變的檢測系統，其特征在于，包括，

PCR擴增裝置，用于擴增待測樣品DNA片段，包含了待檢測的位點；

分子量檢測裝置，所述PCR擴增裝置與所述分子量檢測裝置相連，以便確定所述擴增產物的分子量；以及

熒光讀取裝置，用于讀取熒光值；

結果分析裝置，基于讀取的熒光值，確定所述預定位點的突變類型；

優選的，所述PCR擴增裝置內設置有擴增引物對和檢測探針。

6.一種用于TREM2基因R47H突變的檢測方法，其特征在于，包括使用權利要求1-3任一所述探針或者權利要求4所述試劑盒的步驟。

7.權利要求6的檢測方法，其特征在于，所述步驟為，

采用SEQ?ID?NO:1和?SEQ?ID?NO:2作為PCR擴增引物，權利要求1-3任一所述探針或者權利要求4所述試劑盒中的探針作為熒光檢測探針；對要檢測的DNA樣品進行PCR擴增檢測，最后讀取熒光值，根據熒光值進行結果判斷。

8.權利要求7的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增反應程序為：95℃5min；95℃5s，54℃30s，72℃10s共40個循環。

9.權利要求7的檢測方法，其特征在于，所述結果判斷為，如果僅有(A)熒光信號則樣品DNA為WT/WT純合子，即rs75932628位點為G/G；如果僅有（B）熒光信號則熒光信號則樣品DNA為R47H/R47H突變純合子，即rs75932628位點為A/A；如果既有(A)熒光信號又有（B）熒光信號則樣品DNA為WT/R47H雜合子，即rs75932628位點為G/A。

10.?權利要求1-3任一所述探針或者權利要求4所述試劑盒中的探針用于檢測TREM2基因R47H突變的用途。