[發(fā)明專利]一種高效利用脂肪酸生產(chǎn)甲羥戊酸的方法及構(gòu)建得到的基因工程菌

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310473802.X
• 申請日: 2013-10-12
• 公開（公告）號: CN103571785A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 咸漠;程濤;曹玉錦;鄒慧斌
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/54;C12N15/52;C12N15/70;C12P7/42;C12P7/04;C12R1/19
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種產(chǎn)甲羥戊酸重組大腸肝菌，是在大腸桿菌中過表達(dá)脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(fadL)和脂酰輔酶A合成酶基因(fadD)，得到的重組大腸肝菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述大腸桿菌，其特征在于，脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因Genbank登錄號：AAC75404.2。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述大腸桿菌，其特征在于，脂酰輔酶A合成酶基因Genbank登錄號：AAC74875.1。

4.一種利用脂肪酸生產(chǎn)甲羥戊酸的方法，是在大腸桿菌中導(dǎo)入脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(fadL)和脂酰輔酶A合成酶基因(fadD)，利用重組大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)甲羥戊酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于，具體步驟如下：

1）獲得長鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(fadL)和脂酰輔酶A合成酶基因(fadD)；

2）構(gòu)建含有長鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(fadL)和脂酰輔酶A合成酶基因(fadD)的重組質(zhì)粒；

3）將步驟2）構(gòu)建的質(zhì)粒與質(zhì)粒pYJM11導(dǎo)入大腸桿菌；

4）利用步驟3）得到的重組大腸肝菌利用脂肪酸發(fā)酵生產(chǎn)甲羥戊酸。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述方法，其特征在于，所述脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因Genbank登錄號：AAC75404.2。

7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述方法，其特征在于，所述脂酰輔酶A合成酶基因Genbank登錄號：AAC74875.1。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述方法，其特征在于，具體步驟如下：

1）分別克隆Genbank登錄號：AAC75404.2的長鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(fadL)和Genbank登錄號：AAC74875.1的脂酰輔酶A合成酶基因(fadD)；

2）在步驟1）所述基因5’端和3’端分別引入酶切位點(diǎn)，將所述基因克隆到pET-30a載體上，構(gòu)建重組載體pET-fadL-fadD；

3）將步驟2）得到的重組載體pET-fadL-fadD與pYJM11(pACY-mvaE-mvaS)導(dǎo)入大腸桿菌BL21(DE3)得到重組大腸肝菌；

4）利用步驟3）得到的大腸桿菌利用脂肪酸發(fā)酵生產(chǎn)甲羥戊酸。

9.權(quán)利要求4所述方法在發(fā)酵生產(chǎn)以甲羥戊酸為中間代謝產(chǎn)物產(chǎn)品中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述方法，其特征在于，權(quán)利要求1所述大腸桿菌用于發(fā)酵生產(chǎn)異戊二烯或以異戊二烯為單元合成的萜類化合物。