[發明專利]基于氧化石墨烯和限制性內切酶的DNA甲基化檢測方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201310472714.8
• 申請日: 2013-10-11
• 公開（公告）號: CN103509872A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 衛偉;熊艷翔;劉松琴
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/44;G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 沈振濤

1.一種DNA甲基化檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）DNA序列的選取：含有CCGG序列的一端修飾有熒光基團的探針DNA、與探針DNA有一段互補的靶基因DNA，標準化甲基化靶基因DNA得到的序列1、甲基化轉移酶造成的甲基化靶基因DNA得到的序列2以及引起DNA甲基化化學試劑造成的甲基化靶基因DNA的序列3；

2）DNA雙鏈的雜交：探針DNA分別與靶基因DNA、序列1、序列2和序列3進行雜交，再加入適量的氧化石墨烯，然后加入限制性內切酶，通過觀察甲基化前后雙鏈DNA與氧化石墨烯作用后的熒光恢復程度不同來檢測是否甲基化。

2.根據權利要求1所述的DNA甲基化檢測方法，其特征在于，所述標準化甲基化靶基因DNA是直接人工合成的胞嘧啶位置進行5’C位置甲基化。

3.根據權利要求1所述的DNA甲基化檢測方法，其特征在于，所述限制性內切酶為HpaII。

4.根據權利要求1所述的DNA甲基化檢測方法，其特征在于，所述探針DNA中的CCGG序列中設計一個堿基的錯配，第二個胞嘧啶換成腺嘌呤A。

5.根據權利要求1所述的DNA甲基化檢測方法，其特征在于，所述引起DNA甲基化化學試劑為二甲亞砜和乙醛。

6.根據權利要求4所述的DNA甲基化檢測方法，其特征在于，所述胞嘧啶是CpG島區的胞嘧啶。

7.一種DNA甲基化檢測試劑盒，其特征在于，包括以下成分：

1）25微克/毫升的氧化石墨烯；

2）限制性內切酶HpaII；

3）含有CCGG序列的一端修飾有熒光基團的探針DNA；

4）與探針DNA有一段互補的靶基因DNA；

5）pH為7.2的33mM?tris-醋酸緩沖體系。