[發明專利]一種牡丹雄蕊中阿拉伯聚糖及其提取分離方法

有效

• 申請號: 201310471626.6
• 申請日: 2013-10-11
• 公開（公告）號: CN103788221A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 鄭國生;史美麗;周遠明;馬傳利;于曙光;劉帥
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種活性多糖的提取、分離及鑒定，具體是指牡丹雄蕊中一種阿拉伯聚糖及其提取分離方法。?

背景技術

牡丹原產于中國西部秦嶺和大巴山一帶，除了作為觀賞植物外，還可用于生產丹皮入藥，具有改善心血管疾病、鎮靜、消炎和提高機體免疫力等藥效。?

多糖在自然界中含量極為豐富，并且具有顯著的免疫調節作用、抗腫瘤、降血糖及抗病毒作用等，已引起國內外醫學界的高度重視，成為近年來研究和應用的熱點。民間因牡丹雄蕊茶具有降低血脂、預防和輔助治療心腦血管疾病等功效而備受人們關注，同時因其對胃腸功能紊亂、便秘有積極的輔助治療作用，對前列腺炎、前列腺肥大有輔助治療和恢復作用，被譽為“植物黃金”。?因此，從牡丹雄蕊中提取分離多糖，可以提升牡丹的應用價值和經濟價值，對牡丹的綜合利用具有重要意義。?

到目前為止，國內外對牡丹雄蕊多糖的提取分離及藥理作用研究未見文獻及專利報道，未見從該物種中分離得到本權利書申請的阿拉伯聚糖的相關報道，也未見從其它物種中分離得到該種多糖。?

發明內容

本發明的目的是要提供一種來源于牡丹雄蕊中的阿拉伯聚糖及其提取分離方法，為解決上述問題，本發明研究制定了如下技術方案：?

??1)?制備牡丹雄蕊粗多糖：采集牡丹雄蕊，干燥粉碎，過篩。向粉碎的牡丹雄蕊中加水，經凍融后超聲處理，過濾得破壁雄蕊。破壁后的牡丹雄蕊加入石油醚回流浸提脫脂，過濾后雄蕊加入80％乙醇，回流脫除寡糖。過濾后雄蕊再加入蒸餾水，加熱浸提，抽濾除去殘渣得上清液。上清液減壓濃縮后加入95%的乙醇，靜置過夜，離心，收集沉淀。沉淀經真空冷凍干燥，即得牡丹雄蕊粗多糖。

??2)?除蛋白質：將制備得到的牡丹雄蕊粗多糖，溶于適量蒸餾水中，加入適量sevage試劑。劇烈震蕩，然后5000r/min?離心得上清液。重復多次，上清液合并。?

?3)?透析除鹽、寡糖、單糖等：將脫蛋白的多糖溶液移入透析袋中，密封后先在自來水中透析，再在蒸餾水中透析，每8小時換一次水。之后溶液經濃縮、醇沉、離心、干燥得牡丹雄蕊多糖半純品。?

??4)?牡丹雄蕊多糖半純品的純化：牡丹雄蕊多糖半純品再經DEAE-52纖維素陰離子交換柱和Sephadex?G-100葡聚糖凝膠柱層析，即可分離得到純的牡丹雄蕊阿拉伯聚糖。?

分離獲得的牡丹雄蕊阿拉伯聚糖，其特征在于：7個阿拉伯糖以α-1,5苷鍵連接成主鏈作為重復單元，支鏈以單個阿拉伯糖通過α,1→3苷鍵連接在主鏈的第三、第六個阿拉伯糖上。其結構式為：?

附圖說明

系列附圖為牡丹雄蕊阿拉伯聚糖的NMR圖譜。圖1.?牡丹雄蕊多糖的¹H核磁共振圖譜；?圖2.?牡丹雄蕊多糖的DEPTQ核磁共振圖譜；圖3.?牡丹雄蕊多糖的¹H-¹H?COSY圖譜；?圖4.?牡丹雄蕊多糖的HSQC核磁共振圖譜；?圖5.?牡丹雄蕊多糖的NEOSY核磁共振圖譜。?????

具體實施方式

實施例1?

提取分離本發明的牡丹雄蕊阿拉伯聚糖時，采取了下述各步驟：

1)?制備牡丹雄蕊粗多糖：采集牡丹雄蕊，干燥后用植物粉碎機粉碎，過40目篩。向粉碎的牡丹雄蕊中加入10倍量的水，攪拌均勻，置于超低溫冰箱中-80℃冷凍14小時。迅速投入80℃水浴鍋中解凍，水浴1小時。然后200W超聲處理20分鐘，過濾得固形物為破壁雄蕊。破壁后的牡丹雄蕊中加入石油醚回流6小時，料液比為1:2?(W/V)，浸提脫脂，過濾得雄蕊固形物。向固形物中加入80％乙醇，料液比為1:3(W/V)，回流6～8小時，抽濾，以脫除寡糖。重復1次，抽濾得雄蕊固形物，真空干燥。向固形物中加入蒸餾水，料液比為1:15(W/V)，加熱，溫度控制在90℃，提取時間為3小時，抽濾除去殘渣得提取液。重復提取3次。多次提取液合并后，減壓濃縮得濃縮液。向濃縮液中加入4倍體積95%的乙醇，靜置過夜，4800?r/min，離心10～15?分鐘，收集沉淀。收集的沉淀經真空冷凍干燥即得牡丹雄蕊粗多糖。

2)?除蛋白質：將制備得到的牡丹雄蕊粗多糖，溶于適量蒸餾水中，加入適量sevage試劑。劇烈震蕩，然后5000r/min?離心得上清液。重復多次，上清液合并。?