[發明專利]一種柯薩奇病毒A16型鼠適應株及其應用

有效

• 申請號: 201310471154.4
• 申請日: 2013-10-10
• 公開（公告）號: CN103555672A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發明（設計）人: 李雅靜;薛晨寶;王巍巍;姜德玉;張燕;高強;尹衛東
• 申請（專利權）人: 北京科興生物制品有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A01K67/027;A61K49/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及病毒學和分子生物學領域，具體地說，涉及一種柯薩奇病毒A16型鼠適應株及其應用。

背景技術

手足口病是全球性傳染病，世界大部分地區均有此病流行的報導。1957年在新西蘭首次報導，1958年首次分離出柯薩奇病毒，并于1959年首次提出HFMD命名。早期發現的手足口病的病原體主要為Cox?A16型，手足口病與EV71感染有關的報導開始于20世紀70年代初，1972年EV71首次在美國確認。此后EV71感染與Cox?A16感染交替出現，成為手足口病的主要病原體。其多發生于5歲以下兒童，可引起手、足、口腔等部位的皰疹，少數患兒可引起肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發癥。個別重癥患兒如果病情發展快，導致死亡。其中柯薩奇病毒(Coxasckievirus)A16型(Cox?A16,CA16)是手足口病的主要病原體之一，它是小RNA病毒科的單股正鏈RNA病毒，呈20面立體對稱球形。雖然重癥和死亡病例主要由EV71病毒感染引起，但特別值得關注的是Cox?A16與心肌炎、心包炎、難治性休克等綜合性疾病相關。

我國自1981年在上海始見本病，以后北京、河北、天津、福建、吉林、山東、湖北、西寧、廣東等十幾個省市均有該病的相關報道。手足口病的爆發和流行嚴重影響了人們的日常生活，造成巨大的經濟損失和社會負擔。研制CA16病毒疫苗及藥物，有效控制手足口疫情是目前全球手足口疫區面臨的重大課題。同時因CA16病毒具有種屬限制，僅對宿主敏感，對其它動物不敏感，致使CA16病毒疫苗及藥物在上市之前所需進行的嚴格的安全性和有效性評價方法也成為世界性的難題。因此獲得穩定的CA16感染動物模型及CA16鼠適應株尤為重要。

發明內容

本發明的目的是提供一種柯薩奇病毒A16型鼠適應株及其應用。

為了實現本發明目的，本發明的一種柯薩奇病毒A16型鼠適應株mCA16V-1243，現已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101，保藏編號CGMCC?No.7860，保藏日期2013年7月10日。

上述柯薩奇病毒A16型鼠適應株的制備方法為：將分離的柯薩奇病毒A16型病毒株經過離心獲得上清后，按每只30μL（病毒滴度為6.12lg?CCID50/mL）進行新生乳鼠腦內傳代3-6次，離心處理收集的病毒液即為鼠適應株；末次傳代接種6只4-6日齡BALB/c乳鼠，5-9天后將收集的腦組織、骨骼肌進行勻漿，離心處理后即為柯薩奇病毒A16型鼠適應株mCA16V-1243。

前述制備方法中，柯薩奇病毒A16型病毒株分離自CA16臨床標本，經分離、蝕斑克隆鑒別后，感染RD細胞，于37±1℃培養，傳代1-3次后，收獲病毒液。

所述柯薩奇病毒A16型鼠適應株mCA16V-1243的鑒定方法：將CA16鼠適應株毒種接種6只4-6日齡BALB/c乳鼠，所有接種病毒乳鼠在7天后均呈現1-3條肢體麻痹癥狀，即為成功制備CA16鼠適應株。

本發明還提供所述柯薩奇病毒A16型鼠適應株mCA16V-1243在研究柯薩奇A16型病毒致病機理中的應用。

本發明還提供一種柯薩奇病毒A16型感染動物模型，用所述柯薩奇病毒A16型鼠適應株mCA16V-1243接種4-6日齡BALB/c乳鼠腦，接種量為每只乳鼠50μL（病毒滴度為3.0-7.0LD50/mL），即得。

本發明還提供上述動物模型在評價用于預防或治療由柯薩奇A16型病毒所致傳染病的疫苗安全性和有效性中的應用。

本發明還提供上述動物模型在評價治療由柯薩奇A16型病毒所致傳染病的抗病毒藥物安全性和有效性中的應用。

本發明具有以下優點：

（一）通過病毒培養和動物試驗技術，獲得了柯薩奇病毒A16型BALB/c乳鼠適應株mCA16V-1243，該鼠適應株為柯薩奇A16型病毒疫苗的研發及高效抗病毒藥物的篩選，為病原學及病毒感染機制的研究提供有力的工具。

（二）本發明建立了穩定的柯薩奇病毒A16型感染動物模型。

（三）為柯薩奇A16型病毒疫苗的研發及高效抗病毒藥物的篩選，為病原學及病毒感染機制的研究提供技術支持。

附圖說明

圖1為本發明實施例1中臨床分離病毒株的RT-PCR檢測結果；其中，1為CA16病毒株，2為陰性細胞對照，3為EV71陽性對照，4為空白試劑對照，5為DNA分子量標準。