[發(fā)明專利]一種血液檢驗中致病菌分選挑取的方法

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• 申請日: 2013-10-11
• 公開（公告）號: CN104560760A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 晏健強
• 申請（專利權(quán)）人: 晏健強
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學病害微生物鑒別技術(shù)領(lǐng)域，具體是提供一種簡單且準確的血液檢驗中致病菌分選挑取的方法。

背景技術(shù)

血液是在循環(huán)系統(tǒng)中，心臟和血管腔內(nèi)循環(huán)流動的一種組織。血液組織是結(jié)締組織的一種。由血漿和血細胞組成。血漿內(nèi)含血漿蛋白(白蛋白、球蛋白、纖維蛋白原)、脂蛋白等各種營養(yǎng)成分以及無機鹽、氧、激素、酶、抗體和細胞代謝產(chǎn)物等。血細胞有紅血球、白血球和血小板。哺乳類的血液具有凝血機制，血小板破裂時，會將血漿中原本可水溶的血纖維蛋白和血細胞等凝固成為血餅，剩余的透明液體就叫做血清。

生物體的生理變化和病理變化往往引起血液成分的改變，所以血液成分的檢測有重要的臨床意義。人體正常的血液是沒有細菌的。當人體受到細菌感染后，在抵抗力降低的情況下細菌感染人體一般先引起某一部分的炎癥，如癤、癰、肺炎、腦炎等。醫(yī)學上把因細菌由局部炎癥部位進入血循環(huán)的病癥稱為菌血癥。這時往往會有少量細菌侵入血液，如果人的全身情況很好，這少量的細菌會被身體里產(chǎn)生的各種抗體、吞噬細胞和血液里的白細胞消滅。而如果侵入血管的病菌很多，毒性很強，或者由于人體過勞、營養(yǎng)不良、嚴重創(chuàng)傷或有其他疾病等原因而抵抗力極其低下時，細菌會大量繁殖并產(chǎn)生有毒有害物質(zhì)，隨血流播散到全身。這時患者表現(xiàn)為高熱、寒戰(zhàn)、頭痛等嚴重中毒癥狀，體溫常高達40℃以上。同時，細菌可侵入各個臟器引起臟器的發(fā)炎、化膿。如果播散到皮膚，可出現(xiàn)各種皮疹。醫(yī)學上把細菌進入血液后在血液中生長繁殖引起的病癥稱為敗血癥。如果是化膿性細菌進入血液后，不但在血液中繁殖，引起一些臟器形成膿腫甚至是器官功能障礙、組織灌注不良或低血壓，這種病癥則稱之為膿毒血癥。膿毒癥病死率較高，大約有9％的膿毒癥患者會發(fā)生膿毒性休克和多器管功能不全，重癥監(jiān)護室中一半以上的死亡是由膿毒性休克和多器官功能不全引起的。研究表明，出現(xiàn)臟器器官衰竭、休克、多重感染、嚴重的潛在疾病的患者預(yù)后較差。以上菌血癥、敗血癥、膿毒血癥這三種病癥的一個共同點是患者血液中都有細菌。如果用患者血液做培養(yǎng)，即可以檢出致病菌。因此，血液細菌培養(yǎng)和鑒定的結(jié)果對疾病的診斷與治療具有非常重要的臨床作用。

血培養(yǎng)檢驗是檢測菌血癥和真菌血癥最簡單、最常用的一種方法，是確認機體血流感染的病原學基礎(chǔ)。目前一般性血液細菌培養(yǎng)的方法是由醫(yī)學檢驗員采集的標本經(jīng)過孵育、培養(yǎng)，進行初步判斷，然后再根據(jù)各種病原菌的生物學特性鑒定發(fā)出報告。但在實際臨床操作中，采集的血樣直接孵育培養(yǎng)，常常會出現(xiàn)某些特定的致病菌含量過少、純度過低而未能檢出的情況。尤其是近年來，許多醫(yī)療條件較好的醫(yī)院基本采用自動化的設(shè)備進行血液細菌培養(yǎng)，普遍地存在血培養(yǎng)的陽性率不夠高，培養(yǎng)周期長，易出現(xiàn)污染導致錯誤結(jié)果等問題，這對臨床治療中選擇用藥、及時有效地控制感染和最后病人治療效果都具有非常巨大的影響。

因此提供一種簡單準確且能提高血液檢驗中致病菌純度的方法具有非常重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有生產(chǎn)存在的技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種操作簡單、安全可靠、成本低廉的在血液檢驗中致病菌分選挑取的方法。

本發(fā)明方法采用傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)分離方法與臨床血液檢驗方法進行結(jié)合，從而達到將目標致病菌分選挑取出來。具體技術(shù)方案為一種血液檢驗中細菌分選挑取的方法，其特征在于包括步驟：

1)取樣接種：以無菌操作取患者血樣作為樣品，劃線接種于培養(yǎng)基上，倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)1～2d，觀察菌落生長狀況；

2)分選：將接種培養(yǎng)后的疑似菌單菌落接種于血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基平板上，37℃恒溫培養(yǎng)1～2d，觀察菌落生長狀況；

3)取菌：挑取病害菌，以備用于其他進一步鑒定。

本發(fā)明通過對血液中疑似致病微生物多次進行接種培養(yǎng)后分選，利用擴大培養(yǎng)后不同種類的微生物不同的生長特性和菌落特征使其得以區(qū)分并挑取病害疑似菌進行培養(yǎng)分離，較大程度剔除了雜菌的影響，提高了血樣化驗的準確性。本發(fā)明方法具有成本低廉、易操作實施、重復性好等優(yōu)點，能在一定程度上克服傳統(tǒng)臨床檢驗的局限。

具體實施方式

以下將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明。

實施例

試驗原料和試劑

1)患者血樣；

2)血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基：將血清均勻加熱至56℃并保持30min，貯存于4℃，之后與基本培養(yǎng)基混合，基本培養(yǎng)基占80％～90％，血清占10％～20％。按1％體積分數(shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素)；

試驗步驟：