[發明專利]可分泌抗視黃醇結合蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞及應用

有效

• 申請號: 201310470607.1
• 申請日: 2013-10-10
• 公開（公告）號: CN103525769A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 何志強;王劉花;彭亮;劉莉莉
• 申請（專利權）人: 深圳市菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/28;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 何平

技術領域

本發明涉及視黃醇結合蛋白免疫檢測領域，尤其是涉及一種可分泌抗視黃醇結合蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞及應用。

背景技術

目前臨床上用于腎功能損傷早期診斷的尿小分子蛋白有β2微球蛋白和RBP（視黃醇結合蛋白）。β2微球蛋白在pH﹤5.5時很不穩定，易降解，且β2微球蛋白在尿液中的半衰期較短，在pH4.0環境中放置4小時后有70%的降解，而RBP在相同條件下僅有降解5%。因此，RBP相對于β2微球蛋白在腎功能損傷診斷中更穩定，更可靠。

RBP是一種低分子蛋白，分子量約為21KD，主要由肝細胞合成，主要功能是將視黃醇從肝臟轉運到上皮細胞并能與視網膜上皮組織特異性結合，為其提供維生素A。肝臟中分泌的RBP-視黃醇聚合物與轉鐵蛋白形成穩定的蛋白復合物在血液系統中循環。RBP-視黃醇-轉鐵蛋白復合體在視黃醇釋放后解體，RBP以游離的形式存在于血液系統，由腎小球濾過，再由近曲小管上皮細胞重吸收、降解。

血液中游離的RBP可以從腎小球濾過，其中99.9%經近曲小管上皮細胞重吸收、降解。正常情況下，尿液中RBP排泄量甚微（低于300ng/mL）。若腎小管病變，則重吸收功能下降，會導致尿液中的RBP大量上升。在腎小管損傷病人尿液中，RBP含量大于300ng/mL，一般可以達到正常人的5倍以上，嚴重者其尿液中的RBP含量甚至可以達到10000ng/mL。故尿液中RBP增高具有早期診斷意義，被認為是腎小管損傷的一個良好早期標志物，對RBP的檢測已經被廣泛應用于臨床上對腎臟損傷的診斷中。

RBP的臨床檢測意義還包括急性腎小球腎炎、慢性腎小球腎炎、糖尿病性腎病和慢性腎功能衰竭疾病等，其血清RBP的濃度水平均升高。同時RBP與肝臟病也有關系，RBP與血清膽紅素、谷草轉氨酶和堿性磷酸酶活力均顯著負相關，壞死性肝硬化、膽汁性肝硬化及急、慢性肝炎患者的血清RBP水平均顯著低于正常對照組。

傳統的RBP的測定方法主要有酶聯免疫法、放射免疫法及乳膠免疫比濁法。免疫比濁法因其試劑穩定，容易實現檢測的高通量及操作自動化，且檢測結果快速、準確、可靠，因此成為臨床實驗室最具前景的測定方法。

發明內容

基于此，有必要提供一種可分泌抗視黃醇結合蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞。

此外，還有必要提供上述雜交瘤細胞或其分泌的單克隆抗體在醫學檢測領域的應用。

一種可分泌抗視黃醇結合蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞，保藏號為CCTCC?No：C2013132。

上述可分泌抗視黃醇結合蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞在制備診斷腎臟損傷疾病或肝臟疾病的檢測試劑或檢測設備領域的應用。

上述可分泌抗視黃醇結合蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞在制備視黃醇結合蛋白檢測試劑或檢測設備領域的應用。

一種由上述可分泌抗視黃醇結合蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體。

上述單克隆抗體在制備診斷腎臟損傷疾病或肝臟疾病的檢測試劑或檢測設備領域的應用。

上述單克隆抗體在制備視黃醇結合蛋白檢測試劑或檢測設備領域的應用。

一種視黃醇結合蛋白檢測試劑盒，包括上述單克隆抗體。

在其中一個實施例中，所述視黃醇結合蛋白檢測試劑盒包括第一試劑和第二試劑，其中，所述第一試劑包括30-60mmol/L?Tris緩沖液、60-95mmol/L聚乙二醇、1-5mmol/L疊氮鈉、6-13mmol/L乙二胺四乙酸鈉以及1-5mmol/L牛血清白蛋白；所述第二試劑包括30-60mmol/L?Tris緩沖液、結合有所述單克隆抗體的膠乳顆粒、1-5mmol/L吐溫-20、0.5-3mmol/L疊氮鈉、6-13mmol/L乙二胺四乙酸鈉以及1-5mmol/L牛血清白蛋白。

上述雜交瘤細胞，命名為RBP-2B6，于2013年8月28日保藏在湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學保藏中心（即中國典型培養物保藏中心），保藏號是CCTCC?No：C2013132。

上述雜交瘤細胞的分泌產量高，其分泌得到的抗視黃醇結合蛋白單克隆抗體具有高親和力、高特異性等優點，可廣泛應用在視黃醇結合蛋白檢測領域，如檢測試劑或檢測設備的制備領域等，在特異性、靈敏度和檢測率等方面較之傳統的檢測方法具有顯著的優勢。

附圖說明

圖1為當檢測原為重組RBP抗原，包被濃度為2μg/mL時，RBP單抗效價測定結果圖；

圖2為實施例2中的檢測試劑與對照試劑檢測結果相關性圖。

具體實施方式