[發明專利]一種穩定的蛋白質載藥微粒系統制備方法

在審

• 申請號: 201310469897.8
• 申請日: 2013-10-11
• 公開（公告）號: CN104548116A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 程樹海
• 申請（專利權）人: 程樹海
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K9/19;A61K9/08;A61P35/00;A61K31/706;A61K31/337
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

技術領域

本發明公開一種穩定的蛋白質載藥微粒系統制備方法，可用于體內遞送藥物至病灶部位而發揮藥效，屬于生物制藥技術領域。

背景技術

蛋白質載藥微粒系統用于遞送藥物是目前研究大熱點，通過體內相容性好蛋白質遞送藥物至病灶部位，靶向至病灶緩慢釋放，可以延長藥物半衰期和降低藥物毒性，從而可以提高療效，降低藥物毒性。

蛋白質微粒作為研究熱點，有眾多報道蛋白質微粒制備方法，包括熱交聯、化學交聯、乳化法等。這些制備方法中典型代表為乳化高壓均質法，2005年上市紫杉醇白蛋白納米粒（abraxane）是成功的代表，開創蛋白質微粒系統臨床治療的先河。Abraxane采用乳化高壓均質法技術（美國專利US6749868，US5560933），將白蛋白溶液、?紫杉醇的乙醇溶液和三氯甲烷混合形成乳液，然后使用高壓均質機進行制粒，接著高溫去除有機溶劑后再水化，即可制備出紫杉醇白蛋白納米粒。該制備方法復雜，使用高壓均質和高溫等條件，容易造成蛋白質變性，失去生物活性，也增大了成本，其次使用到三氯甲烷等毒性大溶劑，這無疑影響到產品安全性。

CN201010247885.7公開一種制備用于體內遞送藥理活性物質的蛋白納米粒的方法，利用蛋白質在55-75℃左右打開蛋白質疏水性區域，而利用蛋白質二硫鍵打開再折疊自組裝方法將藥物包埋蛋白納米粒中。但該方法需要在高溫55-75℃左右反應，致使很多藥理活性物質無法耐受高溫，比如紫杉醇在高溫下其7-表紫杉醇雜質會線性增大，從而影響產品的質量。

在現行制備方法中，基本都是根據蛋白質變性原理，采用高溫、高壓、化學變性物質固化蛋白，實現蛋白質微粒系統的制備。然而無論是高壓、高溫、化學變性劑都使得產品質量存在未知不安全因素。要么對蛋白質活性有損失，要么影響藥物和產品質量，均存在一定缺陷。

發明內容

本發明提供一種穩定的蛋白質載藥微粒系統制備方法，解決上述蛋白質微粒制備時高溫、高壓或化學變性劑等缺陷，可在低溫、常壓和無化學變性劑的條件下利用橋梁劑溶液方法制備成蛋白質載藥微粒系統，進一步保障蛋白質活性和蛋白質載藥微粒系統的產品質量。同時應用這種制劑系統遞送藥物至體內而發揮藥效。本發明制備工藝簡單，適合產業化。

本發明提供一種穩定的蛋白質載藥微粒系統制備方法，其利用橋梁劑將含藥物的有機相和含蛋白質的水相溶液混合成均相溶液；來實現蛋白質載藥微粒系統的制備，其具體步驟如下：

1）用有機溶劑溶解藥物，形成含藥有機相；?

2）將蛋白質溶于水或緩沖體系中制備成10~500mg/ml的蛋白質的水相溶液；

3）在步驟1）中加入1%~飽和的橋梁劑溶液混勻，然后將2）中蛋白質水相溶液加入,混勻成均相溶液；

4）在0~80℃條件下，將步驟3）中形成均相溶液直接冷凍干燥制備成凍干粉針，采用5%葡萄糖或生理鹽水等配伍稀釋，即形成穩定的蛋白質載藥微粒系統；

或將步驟3）中均相溶液直接使用水或5%葡萄糖、生理鹽水、緩沖鹽體系進行稀釋，形成穩定的蛋白質載藥微粒系統；

所述橋梁劑為鹽酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽，碳酸鹽中任意一種。

本發明所述的橋梁劑優選氯化鈉，硫酸銨，氯化鉀，硫酸鈉，硫酸鎂，磷酸鈉，磷酸鉀，磷酸二氫鈉，碳酸鈉。

本發明核心技術為通過橋梁劑將含藥物有機相與蛋白質水相溶液混勻成均相溶液來制備蛋白質載藥微粒系統，其所述的橋梁劑為鹽酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽，碳酸鹽。優選氯化鈉，硫酸銨，氯化鉀，硫酸鈉，硫酸鎂，磷酸鈉，磷酸鉀，磷酸二氫鈉，碳酸鈉。更優選氯化鈉。

本發明的制備方法中步驟1）所述有機溶劑為醇類，酮類，酰胺類或亞砜類，優選乙醇、叔丁醇、丙酮、N，N-二甲基乙酰胺、二甲亞砜。

本技術方案制備方法中步驟2）所述蛋白質為白蛋白，血紅蛋白，肌紅蛋白，溶菌酶，免疫球蛋白，轉鐵蛋白，球蛋白，膠原蛋白。優選為人血白蛋白。

本技術方案所述在于步驟4）所述稀釋的倍數為1~500倍，優選為10-50倍。

本發明提供一種穩定蛋白質載藥微粒系統制備方法，其特征在于：所述包載藥物為抗腫瘤藥物，優選紫杉醇，多烯紫杉醇，卡巴他賽，阿霉素，替西羅莫司，西羅莫司，絲裂霉素，羅米地辛，SN38，順鉑及其衍生物，伊立替康、拓撲替康、埃博霉素，伊沙匹龍，硼替佐米。更優選為紫杉醇。

本發明所述蛋白質穩定微粒系統的平均粒徑為10nm~10μm，優選為50nm~500nm，最優選為50nm~250nm。