[發(fā)明專利]馬立克氏病抗性雞的快速檢出方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310469433.7
• 申請(qǐng)日: 2013-10-10
• 公開（公告）號(hào): CN103468824A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韋平;金元昌;韋天超;磨美蘭;黃亮;崔帥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務(wù)所有限責(zé)任公司 45104
• 代理人: 楊立華

1.一種馬立克氏病抗性雞的快速檢出方法，其特征在于采用半巢式PCR對(duì)BF基因可變剪接外顯子7進(jìn)行兩輪擴(kuò)增，

第一輪擴(kuò)增的引物序列為外上游引物5`-GCAGGGAAGAAGGGGAAGGG-3`和外下游引物5`-GGAAGCAGAATGAGATGTGAGAGG-3`；

第二輪擴(kuò)增的引物序列為內(nèi)上游引物5`-TACAACATTGCGCCCGGG-3`和內(nèi)下游引物5`-GGAAGCAGAATGAGATGTGAGAGG-3`。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的馬立克氏病抗性雞的快速檢出方法，其特征在于所述第一輪和

第二輪擴(kuò)增PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件分別為：

第一輪擴(kuò)增PCR反應(yīng)體系：10×PCR?Buffer5.0μL，cDNA模板5.0μL，25mM外上游引物1.0μL，25mM外下游引物1.0μL，1.5U?Taq酶0.6μL，10mM?dNTP?Mixture1.0μL，dd?H₂O36.4μL，共50μL；

第一輪擴(kuò)增PCR反應(yīng)條件：95℃5min；隨后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95℃30s，61℃30s，72℃45s；最后72℃10min；

第二輪擴(kuò)增PCR反應(yīng)體系：10×PCR?Buffer5.0μL，DNA模板5.0μL，25mM內(nèi)上游引物1.0μL，25mM內(nèi)下游引物1.0μL，1.5U?Taq酶0.6μL，10mM?dNTP?Mixture1.0μL，dd?H₂O36.4μL，共50μL；所述DNA模板來(lái)自第一輪PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

第二輪擴(kuò)增PCR反應(yīng)條件：95℃5min；隨后進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括95℃30s，52℃30s，72℃45s；最后72℃10min。