[發明專利]藥典三種秦艽藥材的DNA條形碼鑒別方法

有效

• 申請號: 201310467652.1
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103509871A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 方成武;張明燕;孟楣;彭華勝;馬宗華;黃璐琦;劉守金;楊青山;李慶林
• 申請（專利權）人: 安徽中醫藥大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.藥典三種秦艽藥材的DNA條形碼鑒別方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)取過60-80目篩的秦艽藥材粉末加至離心管中，加入適量預熱的Buffer?PCB和β-巰基乙醇并混勻，65℃左右水浴加熱35-45min，間或混勻；用等體積的酚∶三氯甲烷(1∶1)反復混勻，離心后取上清，反復操作2-3次；加入等體積的三氯甲烷，混勻后離心，吸取上層水相至干凈的離心管中，加入等體積Buffer?BD，混勻，再加等體積的無水乙醇，混勻后全部加入到吸附柱中，靜置2-5min；離心，再分別用適量PW?Solution和Wash?Solution離心，晾干；將吸附柱放入干凈的離心管中，加入60℃左右預熱的TE?Buffer，靜置后離心，即得DNA溶液；

(2)將提取的DNA序列進行PCR擴增與測序，得到ITS、psbA-trnH和rbcL序列，再將psbA-trnH和rbcL拼接，ITS、psbA-trnH和rbcL拼接，得到兩條拼接序列，分別計算遺傳距離，并構建系統發育樹。