[發(fā)明專利]一種使p-JNK和p-P38去磷酸化的結核分枝桿菌分泌蛋白PtpA

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310466907.2
• 申請日: 2013-10-09
• 公開（公告）號: CN103525781A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發(fā)明（設計）人: 劉翠華;汪靜
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N15/70;C07K14/35
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種使p-JNK和p-P38蛋白去磷酸化的結核分枝桿菌分泌蛋白PtpA，其特征在于，氨基酸序列如以下（a）或（b）或（c）：

（a）SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列；

（b）在（a）中的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失或添加一個氨基酸或幾個氨基酸且具有磷酸酯酶活性的由（a）衍生的多肽或其類似物；

（c）與（a）、（b）中氨基酸序列整體相似度在85%以上的由（a）衍生的多肽或其類似物。

2.權利要求1所述的PtpA，其特征在于，添加泛素激活提高其活性。

3.權利要求1所述的PtpA在調(diào)控p-JNK和p-P38激酶活性中的應用。

4.權利要求1所述的PtpA在調(diào)控JNK和P38信號轉導通路中的應用。

5.一種制備權利要求1所述PtpA蛋白的方法，其特征在于，

（1）構建含有PtpA基因的重組質粒pGEX-6P-1-PtpA，并將質粒轉化到大腸桿菌BL21中，以IPTG誘導蛋白表達；（2）超聲破菌，高速離心后收取上清液，將上清液緩緩流過填充好的Glutathione-Sepharose?beads中，然后加入柱洗滌緩沖液充分洗滌柱子，最后加入含有谷胱甘肽的洗脫液洗脫蛋白，將收集的洗脫液加入到30KD的蛋白濃縮管中，離心濃縮；（3）在蛋白濃縮管中加入PBS混勻后離心、分裝蛋白，-80℃保存待用。

6.一種有效提高權利要求1所述PtpA磷酸酯酶活性的泛素蛋白分子，其特征在于，氨基酸序列如以下（d）或（e）或（f）：

（d）SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列；

（e）在（d）中的氨基酸序列經(jīng)過取代、缺失或添加一個氨基酸或幾個氨基酸且具有促進PtpA磷酸酯酶活性的由（d）衍生的多肽或其類似物；

（f）與（d）、（e）中氨基酸序列整體相似度在85%以上的由（d）衍生的多肽或其類似物；PtpA磷酸酯酶活性在泛素蛋白存在時明顯升高。

7.一種制備權利要求6所述泛素蛋白分子的方法，其特征在于，構建含有編碼泛素蛋白分子的基因的重組質粒pET30a-Ubiquitin，并將質粒轉化到大腸桿菌BL21中，以IPTG誘導蛋白表達；超聲破菌，高速離心后收取上清液；將上清液緩緩流過填充好的His-NTA鎳柱中，然后加入柱洗滌緩沖液充分洗滌柱子，最后加入洗脫液洗脫蛋白；將收集的洗脫液加入到10KD的蛋白濃縮管中，離心濃縮；在蛋白濃縮管中加入PBS混勻后離心；分裝蛋白，-80℃保存待用。

8.權利要求6所述泛素蛋白分子在調(diào)控結核分枝桿菌分泌蛋白PtpA活性中應用。

9.權利要求6所述泛素蛋白分子在調(diào)控JNK和P38信號轉導通路中的應用。