[發(fā)明專利]KLF9基因在抑制肝癌中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310465246.1
• 申請(qǐng)日: 2013-10-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104511028B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉永忠;楊兆娟;王博石;劉昀;孫佳彬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61K45/00;A61K38/16;C12Q1/02;C12Q1/6886;G01N33/68;G01N33/574;C12N15/867;A61P1/16;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司31266
• 代理人: 祝蓮君,雷芳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及腫瘤治療領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及KLF9基因在促進(jìn)p53表達(dá)和/或活性，從而抑制肝癌中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著近年來(lái)分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展及人類基因譜的不斷完善，人們對(duì)肝癌發(fā)病原因及發(fā)病機(jī)制又有了新的認(rèn)識(shí)，即肝癌相關(guān)的癌基因的激活及抑癌基因的失活與突變是導(dǎo)致肝細(xì)胞癌變的根本原因。細(xì)胞內(nèi)的癌基因與抑癌基因?qū)?xì)胞的增殖與分化起著正負(fù)調(diào)節(jié)作用。所以說(shuō)，在分子水平上與肝癌相關(guān)癌基因與抑癌基因的變化是肝癌發(fā)生的根本原因。

與此同時(shí)，人們提出了一個(gè)全新的概念:基因治療，為癌癥的治療帶來(lái)了新的希望。所謂癌癥的基因治療就是指以遺傳學(xué)技術(shù)為基礎(chǔ)，將克隆的正常基因序列導(dǎo)入該基因缺陷的患者體內(nèi)，使導(dǎo)入的基因發(fā)揮作用而糾正基因缺陷，或設(shè)計(jì)出已經(jīng)突變的癌基因的反義序列導(dǎo)入患者體內(nèi)，阻止突變的癌基因發(fā)揮其效應(yīng)。癌癥的基因治療最終目的是通過(guò)不同途徑殺傷腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤生長(zhǎng)使腫瘤消退。所以，癌癥的基因治療是對(duì)腫瘤細(xì)胞惡變過(guò)程的逆轉(zhuǎn)，對(duì)正常細(xì)胞并沒(méi)有影響。

目前，抑癌基因的產(chǎn)物主要包括：①轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，如Rb、p53；②負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子，如WT；③周期蛋白依賴性激酶抑制因子(CKI)，如p15、p16、p21；④信號(hào)通路的抑制因子，如ras GTP酶活化蛋白(NF-1)，磷脂酶(PTEN)；⑥D(zhuǎn)NA修復(fù)因子，如BRCA1、BRCA2。⑥與發(fā)育和干細(xì)胞增殖相關(guān)的信號(hào)途徑組分，如：APC、Axin等。

此外，隨著越來(lái)越多的潛在抑癌基因被發(fā)現(xiàn)，在癌癥與抑癌平衡中龐大、復(fù)雜的細(xì)胞通路也逐漸暴露。人們甚至發(fā)現(xiàn)，在相似的細(xì)胞通路中，同一個(gè)基因所起到作用也不盡相同。因此，本領(lǐng)域迫切需要研究對(duì)各種腫瘤尤其是肝癌具有特異性的影響基因，并明確其作用機(jī)制，以開(kāi)發(fā)更有效的基因治療藥物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了KLF9基因及其表達(dá)產(chǎn)物在促進(jìn)p53表達(dá)和或活性從而抑制肝癌中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種KLF9(Krüppel-like factor9，KLF9)基因、蛋白或其促進(jìn)劑的用途，用于制備p53的促效劑；和/或

用于制備預(yù)防和/或治療肝癌的藥物組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的KLF9基因核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示，其編碼的蛋白序列如SEQ ID NO.:2所示。

在另一優(yōu)選例中，所述的KLF9基因來(lái)自哺乳動(dòng)物，較佳地，來(lái)自嚙齒動(dòng)物(大鼠、小鼠)和靈長(zhǎng)動(dòng)物(例如人)，更佳地，來(lái)自人。

在另一優(yōu)選例中，所述的促效劑包括p53表達(dá)促進(jìn)劑和/或p53蛋白活性穩(wěn)定劑。

在另一優(yōu)選例中，所述促效劑用于促進(jìn)p53的表達(dá)和/或促進(jìn)p53蛋白的穩(wěn)定。

在另一優(yōu)選例中，所述的KLF9蛋白包括全長(zhǎng)KLF9蛋白、成熟的KLF9蛋白、KLF9的與DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域ZNF、或含所述ZNF結(jié)構(gòu)域的KLF9活性片段。

在另一優(yōu)選例中，所述的促進(jìn)劑包括KLF9基因表達(dá)產(chǎn)物、促進(jìn)型miRNA、促進(jìn)型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子、或促進(jìn)型靶向小分子化合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物包括(i)KLF9基因、蛋白或其促進(jìn)劑；和(ii)藥學(xué)上可接受的載體。

本發(fā)明第二方面，提供了一種篩選候選化合物的方法，所述化合物可作為KLF9促進(jìn)劑，包括步驟：

(a)在測(cè)試組中，向細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入待測(cè)化合物，并測(cè)定p53和KLF9的表達(dá)和/或活性；在對(duì)照組中，向同樣的培養(yǎng)體系中不加入待測(cè)化合物，并測(cè)定p53和KLF9的表達(dá)和/或活性；其中所述待測(cè)化合物不是KLF9蛋白；

其中，如果對(duì)照組中p53的表達(dá)和/或活性大于對(duì)照組，且對(duì)照組中KLF9的表達(dá)和/或活性大于對(duì)照組，則說(shuō)明該候選化合物為KLF9促進(jìn)劑。

在另一優(yōu)選例中，還包括步驟：

(b)對(duì)步驟(a)中獲得的候選化合物進(jìn)一步測(cè)試其抑制肝癌的效果。

本發(fā)明第三方面，提供了一種KLF9的ZNF結(jié)構(gòu)域的肽序列或核苷酸序列的用途，其特征在于，用于制備p53的促效劑；和/或

用于制備預(yù)防和/或治療肝癌的藥物組合物。

本發(fā)明第四方面，同了一種KLF9基因或其蛋白的用途，用于制備診斷肝癌的試劑或試劑盒。

在另一優(yōu)選例中，所述的試劑包括KLF9的特異性引物、特異性抗體、探針和/或芯片。

在另一優(yōu)選例中，所述的檢測(cè)KLF9蛋白或mRNA的檢測(cè)試劑包括：

(a).抗KLF9蛋白的特異性抗體；和/或