[發明專利]一種生石花無菌播種及再生體系建立的方法

有效

• 申請號: 201310465211.8
• 申請日: 2013-10-08
• 公開（公告）號: CN103583357A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 牟豪杰;王燕;陳劍平;汪一婷;呂永平;陳志
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術、植物莖尖培養技術，主要是一種生石花無菌播種及再生體系建立的方法。

背景技術

生石花(Lithops?pseudotruncatella)為番杏科生石花屬植物。因其形態獨特、色彩斑斕，是很受歡迎的小型觀賞多肉植物。其自然繁殖率低，且原產地不在我國，加之人類過度采掘和對其生境的破壞，目前數量較少、市售價格居高不下，使其推廣受到限制。因此，利用植物組織培養技術進行阿房宮壽的快速繁殖，對于保存優良種質資源、繁殖名優珍稀品種具有重要的意義，以實現其規模化生產以滿足國內外市場的需求。植物組織培養方法可以在短期內快使植物速繁殖，不僅繁殖速度塊，且因為是無性繁殖可以保持與母株的一致的遺傳性狀。但是，在此之前還沒有關于建立生石花組培再生體系的報道，更沒有成功的實例。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種生石花無菌播種及再生體系建立的方法。

本發明的目的是通過如下技術方案來完成的。這種生石花無菌播種及再生體系建立的方法，包括如下步驟：

1）、培養基的配制：

（1）基本培養基：MS或1/2MS，其中蔗糖20～30g/L，瓊脂5～9g/L，pH=5.8;

（2）誘導培養基：MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.1mg/L;

（3）分化培養基：MS+6-BA0～0.05mg/L；

（4）增殖培養基：MS+6-BA0.05～0.3mg/L+NAA0.05～0.1mg/L;

2）種子的消毒及接種：以生石花的種子為外植體材料，將消毒處理后的種子在無菌條件下接種于誘導培養基上培養；

3）愈傷組織的誘導及分化：將步驟2）種子萌發后誘導愈傷組織形成并進行不定芽的分化培養；

4）不定芽的增殖：將步驟3）的不定芽叢接種于增殖培養基上進行增殖培養；

5）壯苗培養：將步驟4）不定芽分成單株后轉至基本培養基上進行壯苗培養。

進一步地，本發明在所述步驟1）中，所述的培養基包括基本培養基和組培各階段培養基的組分具體為：

（1）基本培養基：MS培養基，其中蔗糖20～30g/L，瓊脂5～9g/L，pH=5.8;

（2）誘導培養基：MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.1mg/L;

（3）分化培養基：MS+6-BA0～0.05mg/L；

（4）增殖培養基：MS+6-BA0.05～0.3mg/L+NAA0.05～0.1mg/L;

進一步地，本發明在所述步驟2）中，以生石花的種子為外植體材料，將其置于1.5ml或2ml的PE離心管中進行消毒處理，先用洗潔精溶液浸泡0.5h后再用自來水清洗，然后依次在體積比為70%的酒精溶液和有效氯濃度為1%的次氯酸鈉溶液中分別浸泡30s和6min，最后用無菌水沖洗3～5遍，每遍2min(移液槍操作)。

進一步地，本發明在所述步驟3）中，種子培養2～4周后陸續萌發，萌發后的生石花在誘導培養基上培養2～3周后有愈傷組織形成，挑取生長狀態較好的愈傷組織至于分化培養基上培養，約4周后愈傷組織開始分化不定芽。

進一步地，本發明在所述步驟5）中，不定芽分成單株后轉至基本培養基上進行壯苗培養（剝去皮蛻），培養2～4周后成為具有根系的壯苗。

進一步地，本發明在所述步驟3）、4）、5）中，所述的培養條件是，培養溫度為23±2℃、光照強度為60～100μmol·m^-2·s^-1、光照時間為10～16小時/天；

本發明的有益效果是：利用植物組織培養技術對生石花進行了播種及再生快繁培養，能夠在較短時間內獲得大量遺傳性狀一致的優質壯苗，克服了常規繁殖方法慢的缺點，對其規模化生產和種質資源保存都具有積極意義，同時本技術也為其遺傳轉化體系的建立奠定了堅實的實驗基礎。

具體實施方式

下面通過具體實施方式對本發明作進一步闡述，實施例將幫助更好地理解本發明，但本發明并不僅僅局限于下述實施例。

實施例1

本發明提供了一種生石花無菌播種及再生體系建立的方法，其步驟為：

1）、培養基的配制

（1）基本培養基：MS培養基，其中蔗糖30g/L，瓊脂7.5g/L，pH=5.8;

（2）誘導培養基：MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.1mg/L;