[發明專利]人胚肺成纖維細胞株在制備狂犬滅活疫苗中的應用

無效

• 申請號: 201310464748.2
• 申請日: 2013-10-08
• 公開（公告）號: CN103468650A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 楊喆;馬波;李偉;何麗芳;王麗麗;陳敏;王馨;尹孝兵;任正勇;高顯專;胡超
• 申請（專利權）人: 云南沃森生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/205;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

發明所屬領域：

本發明屬于疫苗技術領域，具體地說，本發明涉及人胚肺成纖維細胞株在制備狂犬滅活疫苗中的應用，以及人胚肺成纖維細胞株在制備治療狂犬病的滅活疫苗中的應用

背景技術：

狂犬病是由狂犬病病毒感染引起的人畜共患的自然疫源性疾病，狂犬病是中國法定報告中死亡數和病死率最高的傳染性疾病。據2003年世界狂犬病調查報告顯示，中國的發病人數僅次于印度，居世界第二位，中國衛生部已將狂犬病列為2類傳染病加以管理，但近年來中國狂犬病疫情一直呈上升趨勢，疫情形勢十分嚴峻。狂犬病尚無有效的治療措施，接種安全可靠的狂犬病疫苗是預防和控制狂犬病最重要的手段之一。

目前世界大量生產的狂犬疫苗有四種：第一種以美國為代表的二倍體細胞狂犬疫苗，但細胞難培養，且代次高，更重要的疫苗成本高，難廣泛普遍使用；第二種以法國為代表的Vero細胞為培養基質的凍干滅活疫苗，但不能保證細胞基質的致瘤和細胞DNA。第三種和第四種以中國為代表的地鼠腎細胞和日本的雞胚、鴨胚疫苗，由于細胞來源于普通動物，無法保證細胞不攜帶外源因子，也不能保證細胞基質的致瘤性和細胞的DNA，并且動物器官的可用量是限制工業化生產的因素。

實驗已經證明，在人體試驗中所使用的任何疫苗的免疫原性都無法和人胚肺二倍體成纖維細胞株相比。人二倍體細胞為正常核型細胞，無致癌性，并且由于人二倍體細胞疫苗（human?diploid?cell?vaccine簡稱HDCV）所具有的高免疫性和良好的耐受性，目前已經成為評價任何一種人用新疫苗的標準疫苗。文獻報道，二倍體狂犬疫苗暴露前面免疫一劑即可達到其他狂犬疫苗5劑的效果，暴露后免疫也表現出明顯高于普通狂犬疫苗的保護效果，被認為是狂犬病疫苗的黃金標準。但HDCV的一個缺點是人二倍體細胞（HDC）不容易培養，而且狂犬病在HDC上培養的病毒滴度相對較低，僅能在有限的細胞瓶內培養，這使得疫苗的價格非常昂貴。所以現在僅在歐美發達國家使用。在發展中國家，由于其昂貴的價格而限制了這種疫苗的使用。

國內狂犬疫苗主要為地鼠腎細胞疫苗和Vero細胞疫苗。地鼠腎細胞來源于普通動物，無法保證細胞不攜帶外源因子，且動物器官的可用量是限制工業化生產的關鍵因素之一；Vero細胞來源于非洲綠猴腎細胞，細胞基質的致瘤性存在著潛在隱患，且細胞殘余DNA難以有效去除，安全得不到保證，也是國內多家狂犬疫苗生產企業限制產品質量的關鍵因素之一。近年來國內狂犬病疫苗廠家因現有狂犬病疫苗免疫原性不強，中和抗體產生緩慢，Vero細胞DNA不能有效去除等問題而對產品質量形成制約，國內廠家正在積極研制更高標準的替代品，作為黃金標準的人二倍體細胞疫苗成為關注的焦點。

中國專利201210137898.8公開了利用人二倍體細胞WI-38制備的細胞狂犬病疫苗和制備方法；中國專利201310009682.8公開了利用人二倍體細胞MRC-5制備的細胞狂犬病疫苗和制備方法；中國專利200510080058.2公開了利用人二倍體細胞MRC-5，WI-38制備的細胞狂犬病疫苗和制備方法；中國專利201010253554.4公開了利用人二倍體細胞KMB-17制備的細胞狂犬病疫苗和制備方法。中國專利201210371784.X公開了一種人胚肺二倍體成纖維細胞株Walvax-2，但是此細胞否對狂犬病病毒敏感還不清楚，也不知此細胞是否可應用于生產狂犬病疫苗。

從已有技術來看，無論是國外建立的細胞株MRC-5，WI-38，還是國內建立的細胞株2BS、KMB-17，在病毒疫苗中已使用多年，安全性不容置疑。但缺點是產量低，細胞代數高，限制了病毒的產量提高和進一步使用。更重要的是狂犬病病毒在現有的二倍體細胞上培養的病毒滴度相對較低，僅能在有限的細胞瓶內培養，使工業化大規模生產難已實施。

發明內容：

本發明的一個目的是提供人胚肺二倍體成纖維細胞株在制備狂犬滅活疫苗中的應用，人胚肺二倍體成纖維細胞株Walvax-2對狂犬病毒易感，使用此細胞生產狂犬病毒疫苗可得到一種抗原純度高、免疫效果好、安全性高、價格低的人用二倍體細胞狂犬病毒滅活純化疫苗。

本發明的另一個目的是提供人胚肺二倍體成纖維細胞株在制備治療狂犬病的滅活疫苗中的應用

本發明公開了人胚肺二倍體成纖維細胞株Walvax-2在制備狂犬滅活疫苗中的應用。