[發明專利]還原敏感偶氮連接單元的合成及其在DNA測序中的用途

有效

• 申請號: 201310462509.3
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103539697A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發明（設計）人: 沈玉梅;劉亞智;趙小東;邵志峰;湯道年;江敏;龔兵;伍新燕;李小衛
• 申請（專利權）人: 上海交通大學;華東理工大學
• 主分類號: C07C245/08
• 分類號: C07C245/08;C07H19/10;C07H1/00;C12Q1/68
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 牛山;陳少凌

1.一種還原敏感偶氮連接單元，其結構式如式(I)所示：

其中m為0～44中任一整數，n為0～44中任一整數。

2.如權利要求1所述的還原敏感偶氮連接單元，其特征在于，所述m為0～10中任一整數，n為0～10中任一整數。

3.如權利要求2所述的還原敏感偶氮連接單元，其特征在于，所述m=1，n為0～10中任一整數。

4.一種如權利要求1所述的還原敏感偶氮連接單元的合成方法，其特征在于，包括如下步驟：

第一步、在DMF存在的條件下，碳酸鉀、化合物E和化合物G反應，得到化合物H所述碳酸鉀、化合物E和化合物G的摩爾比為(1.0～1.5)：(3.0～5.5)：1.0；

第二步、在冰浴的條件下，TFA和化合物H反應，得到化合物I所述TFA和化合物H的摩爾比為(3.0～8.0)：1.0。

5.如權利要求4所述的還原敏感偶氮連接單元的合成方法，其特征在于，所述化合物E的合成包括如下步驟：

A、在甲苯存在的條件下，摩爾比為(1.0～3.5)：1.0的48％HBr與化合物A反應，得到化合物B其中，n為0～44中任一整數；

B、在氨水存在條件下，化合物B和氨水反應，得到化合物C所述氨水與化合物B的摩爾比為(1.0～30)：1.0；

C、在水、甲醇和氫氧化鈉存在的條件下，BOC酸酐和化合物C反應，得到化合物D所述BOC酸酐和化合物C的摩爾比為(1.0～3.5)：1.0；

D、在三乙胺、DMAP存在的條件下，化合物TsCl和化合物D反應，得到化合物E所述三乙胺、DMAP、TsCl和化合物D的摩爾比為(1.0～5.0)：(0.1～0.5)：(1.0～4.0)：1.0。

6.如權利要求4所述的還原敏感偶氮連接單元的合成方法，其特征在于，所述化合物G的合成包括如下步驟：

在水、甲醇存在的條件下，亞硝酸鈉、4-氨基苯乙醇和化合物F反應，得到化合物G所述亞硝酸鈉、4-氨基苯乙醇和化合物F的摩爾比為(1.0～4.5)：1.0；(1.0～1.5)；其中，m為0～44中任一整數。

7.一種如權利要求1所述的還原敏感偶氮連接單元在DNA測序中的用途，其特征在于，所述還原敏感偶氮連接單元與核苷酸及熒光素連接得到可逆終端，所述可逆終端用于DNA合成測序。

8.一種可逆終端，其特征在于，所述可逆終端由如權利要求1所述的還原敏感偶氮連接單元與核苷酸及熒光素連接而得。

9.如權利要求8所述的可逆終端，其特征在于，所述連接具體包括如下步驟：

A、以無水DMF為溶劑，在TEA存在的條件下，所述還原敏感偶氮連接單元與TAMRA(5／6)反應，得化合物J所述TAMRA(5／6)、還原敏感偶氮連接單元和TEA的摩爾比為1：(1～3)：(3～10)；

B、在DMAP、DIPEA存在的條件下，化合物J和DSC反應，得到中間體K該中間體K與dUTP(AP3)反應，得到化合物L所述化合物J、DSC、DMAP、DIPEA和dUTP(AP3)的摩爾比為1：(5～12)：(2～3)：(2～4)：(2～8)。