[發明專利]一株鴨源H4N6亞型禽流感病毒毒株及其應用

有效

• 申請號: 201310461205.5
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103571799A
• 公開（公告）日: 2014-02-12
• 發明（設計）人: 楊德全;劉佩紅;周錦萍;鞠厚斌;葛菲菲;劉健;王建;葛杰;鄧波
• 申請（專利權）人: 上海市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;G01N33/569;A61K39/145;A61P31/16;C12N15/44;C12R1/93
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 朱水平;沈利

技術領域

本發明屬于動物病毒學領域，涉及一株分離的病毒新毒株及其應用，具體為一株鴨源H4N6亞型禽流感病毒毒株及其應用。

背景技術

禽流感(Avian?influenza，AI)是由A型流感病毒引起的一種嚴重危害禽類健康的傳染性疾病。禽類感染禽流感病毒(Avian?influenza?virus,AIV)后，癥狀可表現為非顯性感染、亞臨診感染，或輕度呼吸道疾病、產蛋量降低直至急性全身致死性疾病等多種形式。AIV據其致病性可分為高致病性AIV(Highly?Pathogenic?Avian?Influenza?virus,HPAIV)和低致病性AIV(Low?Pathogenic?Avian?Influenza?virus,LPAIV)。H4亞型屬于低致病性AIV，多從水禽和野鳥體內分離到，在鴨、鵝等體內持續存在，并且可能傳播給雞。盡管這些病毒對動物體多呈低致病性，但能夠使產蛋量下降，從而給養禽業造成損失。早在1956年，捷克斯洛伐克就在家鴨中分離到了H4N6，1999年，Alexander首次報道從加拿大患有肺炎的豬體內分離到H4N6亞型AIV，而在俄羅斯和中國也有類似報道，表明該亞型病毒也可以在種間傳播。H4亞型AIV的宿主范圍比較廣，包括雞、火雞、鴨、野鴨、鴕鳥、鸚鵡，在死海豹和病豬上也曾分離到了H4亞型AIV，說明H4亞型AIV對哺乳動物也有一定的致病性。另外，H4亞型AIV感染后，可能再次感染H5、H9或其他亞型AIV，在機體內其NA基因和內部基因可能發生復雜的基因重組，產生新型的重組病毒。因此，在AI監測中，也應該對H4亞型AIV引起高度的關注。AIV存在著廣泛的抗原漂移和抗原轉變現象，其抗原變異頻率很高。因此，若能夠對AIV進行全基因組序列測定，對于研究禽流感病毒的檢測、分布、流行規律以及控制禽流感的流行、蔓延都將具有非常重大的意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對AIV存在著廣泛的抗原漂移和抗原轉變現象，其抗原變異頻率很高的現狀，而對一株鴨源H4N6亞型禽流感病毒毒株進行全基因組序列測定，并將其信息用于研究禽流感病毒的檢測、分布、流行規律以及控制禽流感的流行和蔓延。本發明的H4N6亞型禽流感病毒毒株的基因組信息具有重大價值。

本發明提供的技術方案之一是：一株甲型流感病毒毒株，其保藏號為CGMCC?NO.7606。

所述的甲型流感病毒毒株為鴨源H4N6亞型禽流感病毒毒株A/duck/Shanghai/Y20/06(H4N6)，在病毒HA基因切割位點附近的氨基酸序列為“PEKASR↓GLF”，為低致病力禽流感毒株特征。所述的甲型流感病毒毒株于2013年5月13日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，其分類命名為：甲型流感病毒，其保藏編號為CGMCC?NO.7606。

所述的甲型流感病毒毒株，其PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS8個基因片段的CDS序列分別如SEQ?ID?NO：1～SEQ?ID?NO：8所示。其中HA和NA基因與H4N6亞型禽流感病毒處于同一分支內；而PB2、PB1、NP、PA基因與目前在我國流行的H6亞型禽流感病毒關系密切；M基因與A/environment/Korea/CSM05/2004(H3N1)處于同一分支；而NS基因與A/wild?duck/Korea/YS44/2004(H1N2)同源性最高，因此，這是一株重組禽流感病毒毒株。

本發明提供的技術方案之二是：前述保藏號為CGMCC?NO.7606的甲型流感病毒毒株的制備方法，其包括步驟：將保藏號為CGMCC?NO.7606的甲型流感病毒毒株以0.2mL/枚的接種量接種9～10日齡的SPF雞胚，其中所述毒株的有效劑量為10⁴～10⁵EID₅₀/mL，然后將接種后的雞胚置于孵化器中培養48～96h并棄去24h內死亡的雞胚，收集感染雞胚的尿囊液即得。

本發明提供的技術方案之三是：前述保藏號為CGMCC?NO.7606的甲型流感病毒毒株在制備H4N6亞型流感病毒診斷試劑中的應用。

本發明提供的技術方案之四是：前述保藏號為CGMCC?NO.7606的甲型流感病毒毒株在制備H4亞型禽流感病毒疫苗中的應用。