[發(fā)明專利]用于制備避孕疫苗的自組裝多肽納米

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310461036.5
• 申請日: 2013-09-23
• 公開（公告）號: CN103539859A
• 公開（公告）日: 2014-01-29
• 發(fā)明（設計）人: 唐帥;梁志清;何畏;王延洲;孫黎黎;徐萍萍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: C07K16/38
• 分類號: C07K16/38;A61K39/00;A61K39/39;A61P15/16;C07K19/00;C07K14/81
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權代理事務所 11308
• 代理人: 周維鋒

技術領域

本發(fā)明屬于免疫學領域，特別涉及避孕疫苗的研制技術。

背景技術

源于自然界中廣泛存在的蛋白質(zhì)自組裝現(xiàn)象,近年來多肽的自組裝逐漸成為材料學和生物醫(yī)學等領域的研究熱點。通過合理調(diào)控多肽的分子結構以及改變外界的環(huán)境,多肽分子可以利用氫鍵、疏水性作用、π-π堆積作用等非共價鍵力自發(fā)或觸發(fā)地自組裝形成形態(tài)與結構特異的組裝體。由于多肽自身具有良好的生物相容性和可控的降解性能,利用多肽自組裝技術構建的各種功能性材料在藥物控制釋放、組織工程支架材料以及生物礦化等領域內(nèi)有著巨大的應用前景。

避孕疫苗(contraceptive?vaccine,CV)的研發(fā)思路起源于免疫性不孕患者體內(nèi)存在生育抑制相關的特異性抗體，免疫性避孕的作用原理是選擇與生殖過程密切相關關鍵抗原成分制成疫苗，誘導受者產(chǎn)生特異性免疫應答，通過高效、特異地抑制精或卵子發(fā)生、影響精子活力、頂體反應或獲能、干擾精卵相互作用、結合或融合，及阻斷胚胎種植或發(fā)育的一個或多個環(huán)節(jié)，從而達到控制生育的目的。目前，避疫苗的研究主要集中在靶抗原的篩選，而在疫苗設計和免疫策略的研究方面落后于他治療性和預防性疫苗。截至目前，已有數(shù)量眾多的免疫避孕靶抗原被篩選出來，是僅有人絨毛膜促性腺激素(human?chorionic?gonadotropin，HCG)嵌合肽疫苗進入臨試驗，因而，有必要在現(xiàn)有免疫避孕靶抗原的基礎上，結合在其他治療性和預防性疫苗中成功應用的疫苗設計和免疫策略，深入挖掘現(xiàn)有免疫避孕靶抗原的潛力，使得更多的避孕疫苗有望進入臨床。

近年來，基于Eppin的避孕疫苗研究取得了一定的進展，但仍存在以下問題：(1)采用Eppin優(yōu)勢表位疫苗進行免疫能減少不良反應，但免疫原性差；(2)表位交聯(lián)載體蛋白的方法可以增強免疫原性，但所產(chǎn)生的抗體特異性差；(3)基于Eppin的避孕疫苗實驗研究中通常聯(lián)合使用免疫佐劑如弗氏佐劑，其在人體中的應用存在安全性問題；因此，解決這一問題的關鍵在于構建更加安全、有效的避孕疫苗運載體系。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供Q11多肽與附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽的聯(lián)合應用，該應用可以提高附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽的免疫原性，為避孕疫苗的制備提供新的思路。本發(fā)明的目的之二在于提供一類融合多肽，其具有較高的免疫原性。本能發(fā)明的目的之三在于提供一段表位肽，用其制備避孕疫苗具有較好的免疫原性。本發(fā)明的目的之四在于提供自組裝多肽納米纖維試劑盒，其能用于制備自組裝多肽納米纖維工作液；另外，還提供了自組裝多肽納米纖維工作液的制備方法，其操作簡單，工藝穩(wěn)定。

以本實驗室篩選的Eppin優(yōu)勢抗原表位為基礎，與具有多價表達抗原表位特征的自組裝納米肽序列(QQKFQFQFEQQ，Q11)進行偶聯(lián)，利用人工合成肽技術固相合成融合多肽E-Q11，通過調(diào)整自組裝條件制備E-Q11自組裝納米疫苗。結果表明，采用全化學合成方法獲得的融合多肽E-Q11純度大于90%，并能在PBS中完成自組裝，CD分析E-Q11肽具有β折疊二級結構，TEM觀察發(fā)現(xiàn)E-Q11肽能夠自組裝形成納米纖維結構，E-Q11肽能與抗血清發(fā)生的結合反應。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案為：

Q11多肽（簡稱Q11）與附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽聯(lián)合在制備針對附睪蛋白酶抑制蛋白抗體的免疫原中的應用，所述Q11多肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。表1中羅列了部分附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽的氨基酸序列。表1中的表位肽可與Q11多肽聯(lián)合，制備針對附睪蛋白酶抑制蛋白抗體的免疫原。

由于蛋白抗原表面含有多種表位既有T細胞表位，也有B細胞表位，而且這兩種主要表位還有優(yōu)勢、亞優(yōu)勢、隱匿性甚至負調(diào)性表位之分。特別是細胞毒性T細胞（CTL）表位，可以刺激抗原特異性CTL殺傷具有表位抗原的靶細胞，引起免疫偏移而導致免疫損傷，因此Eppin全長蛋白并不適宜用于避孕疫苗的研發(fā)，從而有必要將Eppin避孕疫苗的研究從蛋白水平向表位水平過渡。進一步，所述的應用，所述表位肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:2所示，其作為優(yōu)勢表位。