[發明專利]一種油茶組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310459176.9
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN103461143A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 譚曉風;袁軍;李澤;范曉明;石斌
• 申請（專利權）人: 中南林業科技大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及組織培養技術，具體地說，涉及一種油茶組織培養快速繁殖方法。

背景技術

油茶（Camellia?oleifera）是山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia）植物，是我國特有的優質木本油料樹種，與油橄欖、油棕和椰子并稱為世界四大木本油料樹種。茶油營養豐富，色清味香，耐貯藏，是優質食用油之一，被譽為“東方橄欖油”，同時副產物還是生產化肥、農藥、藥品的優質原料。隨著人類生活水平的提高，油茶營養價值被廣泛認知，茶油市場需求空間的急劇增加，然而，目前的茶油產量遠遠不能滿足人們日常生活的需要，油茶低產低效嚴重制約產業的發展。油茶低產低效的重要原因之一就是良種化程度低，優良品種畝產茶油可達75kg以上，是現有林分產量的10倍以上，而目前油茶的優良品種有200多個，如何將這些油茶良種盡快應用于生產，從而提高整個油茶產業的產量水平，育苗技術和產業化水平是關鍵。目前，油茶種苗繁育主要采用芽苗砧嫁接育苗，但芽苗砧嫁接育苗出圃時間長，而且受育苗季節的限制，難以滿足全國油茶產業發展對油茶優良無性系的要求，油茶組織培養快速繁育成為必然趨勢。

油茶屬于喜干旱植物，根系在不透氣的情況下較難生根，因此油茶組織培養普遍面臨生根困難的技術瓶頸，雖然采用瓶外生根的方法能提高生根率，但由于細菌等污染較為嚴重，不能滿足基因改良過程中如轉基因等操作的要求；同時油茶品種繁多，在不同品種生長習性方面有差異，因此不同品種之間各個階段的培養基成分及處理都有很大的差異，利用現有技術培育‘華碩’等近年選育的品種不能達到預期的效果，更不能滿足工廠化育苗的要求。

發明內容

本發明的目的是提供一種油茶組織培養快速繁殖方法。

為了實現本發明目的，本發明的一種油茶組織培養快速繁殖方法，包括外植體消毒、初代培養、繼代增殖培養、生根培養和移栽的步驟。其中，生根培養使用的生根培養基，其制備方法為：配制含0.5mg/L?IBA的1/2MS瓊脂培養基，其中瓊脂為7-10g/L，pH值5.0-5.5（優選7g/L，pH值5.5），用網兜包好粉碎的珍珠巖，放入融化的培養基中，待珍珠巖充分吸收培養基后，稍瀝干，滅菌，即得。

外植體消毒具體為：取油茶新稍抽出5-10cm，葉片數4-6片的枝條作為外植體，用水沖洗8-15min，然后浸泡于75%酒精中10-60s，用水沖洗后，再用0.1%HgCl₂處理2-4min，最后用無菌水沖洗3-5遍。

初代培養具體為：將消毒好的外植體接入初代培養基中，暗培養1-3d后，在光照條件下培養20-25d，培養溫度為26士1℃。所述初代培養基為：MS+1-4mg/L6-BA+0.05-0.2mg/L?IAA+30g/L蔗糖+瓊脂7-10g/L，pH5.4-5.8。優選6-BA為2mg/L，IAA為0.05或0.2mg/L。

前述光照條件為：光照強度1800-2000lx，光照時間14-16h/d。

繼代增殖培養具體為：將初代培養的外植體的無菌組織莖段切下接種到繼代培養基中，進行不定芽的繼代增殖培養；培養條件為：暗培養1-3d后，在光照條件下培養25-30d；培養溫度為26士1℃。所述繼代培養基為：MS+2-4mg/L6-BA+0.05-0.2mg/L?IBA+30g/L蔗糖+瓊脂7-10g/L，pH5.4-5.8。優選6-BA為2-3mg/L，IBA為0.05-0.1mg/L。

前述光照條件為：光照強度1800-2000lx，光照時間14-16h/d。

生根培養具體為：繼代增殖培養后，取長至2-3cm的無菌苗進行生根培養，將無菌苗插入生根培養基中進行培養，培養溫度為26士1℃；先進行暗培養5-7d，然后在光照條件下培養至生根，光照強度為1800-2000lx，光照時間14-16h/d。

移栽具體為：生根培養12-16d后，將無菌苗轉移到泥炭土、珍珠巖和油茶專用肥按6:3:1的體積比混合的基質中，覆蓋薄膜，保持濕度80%以上，溫度27-28℃，12-18d后移栽至常溫大棚或圃地中。

上述油茶組織培養快速繁殖方法特別適用于油茶品種‘華碩’。