[發明專利]柱層析分離法提取羊膽汁中牛磺膽酸的方法有效
| 申請號： | 201310456934.1 | 申請日： | 2013-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN103804452A | 公開（公告）日： | 2014-05-21 |
| 發明（設計）人： | 孔艷飛 | 申請（專利權）人： | 淮北市恒通生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07J9/00 | 分類號： | C07J9/00 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 235000 安*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 層析 分離法 提取 膽汁 中牛磺 膽酸 方法 | ||
1.柱層析分離法提取羊膽汁中牛磺膽酸的方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）過濾：取新鮮羊膽汁于雙層沙布內靜置過濾24～48小時，收集濾液；
（2）蛋白沉淀處理：于步驟（1）的濾液中加入2～4倍體積量的蛋白沉淀劑，攪拌后以10000～20000rpm/min、4～10℃離心30～60分鐘，收集得到黃綠色上清液；
（3）除色素處理：于步驟（2）的上清液中加入10～20g/100ml活性碳，30～50℃加熱10～30分鐘，冷卻后以10000～20000rpm/min、4～10℃離心30～60分鐘，收集得到無色上清液；
（4）濃縮：將步驟（3）的上清液于旋轉蒸發儀濃縮10～20倍；
（5）鹽析：于步驟（4）的濃縮液體中加入10～50倍體積量的水，使用酸調節pH值為6.0～7.0，加入氯化鈉至攪拌出現白色沉淀物，于4～10℃放置過夜；
（6）萃取：用體積比為（4～10）：（1：3）氯仿：乙醇的混合液溶解步驟（5）的沉淀物，用分液漏斗萃取2～5次，蒸餾回收混合液的，得到粘稠液體；
（7）脫水濃縮：將步驟（6）的粘稠液體用無水硫酸鈉過濾除去其中水分，得到牛磺膽酸粗品；
（8）柱層析分離：將上述牛磺膽酸粗品加入硅膠層析柱上，用體積比為2～4：0.5～1：2～4的氯仿、異丙醇和乙醇作為流動相洗脫，收集460?nm處有吸收值的液體，置于旋轉蒸發儀中濃縮回收流動相，收集所得白色結晶冷凍保存，即為牛磺膽酸的純品。
2.如權利要求1所述的柱層析分離法提取羊膽汁中牛磺膽酸的方法，其特征在于：所述步驟（2）使用的蛋白沉淀劑為甲醇、乙醇和乙腈的一種或兩種組成的混合溶劑。
3.如權利要求2所述的柱層析分離法提取羊膽汁中牛磺膽酸的方法，其特征在于：所述步驟（2）使用的蛋白沉淀劑為乙腈。
4.如權利要求1所述的柱層析分離法提取羊膽汁中牛磺膽酸的方法，其特征在于：所述步驟（5）使用的酸為鹽酸、甲酸或醋酸。
5.如權利要求4所述的柱層析分離法提取羊膽汁中牛磺膽酸的方法，其特征在于：所述步驟（5）使用的酸為鹽酸。
6.如權利要求1所述的柱層析分離法提取羊膽汁中牛磺膽酸的方法，其特征在于：所述步驟（6）中氯仿與乙醇的體積比為4：1。
7.如權利要求1所述的柱層析分離法提取羊膽汁中牛磺膽酸的方法，其特征在于：所述步驟（8）的流動相中氯仿與異丙醇和乙醇。
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